2010 Fiscal Year Annual Research Report
カタラーゼ遺伝子変異マウスの初代培養肝細胞を用いた環境化学物質評価法の開発
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21310022
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
汪 達紘 岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (90294404)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
筒井 研 岡山大学, 自然生命科学研究支援センター, 教授 (70108158)
佐野 訓明 岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (00294405)
中村 和行 山口大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (90107748)
藤田 洋史 岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (20423288)
荻野 景規 岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究料, 教授 (70204104)
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| Keywords | カタラーゼ遺伝子変異マウス / 過酸化水素 / ヒドロキノン / レスベラトロール / プロテオーム / アポトーシス / 美白クリーム / 酸化ストレス |
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| Research Abstract |
この研究ではカタラーゼ遺伝子変異マウスの初代培養肝細胞を用いた酸化ストレス誘発有害物質のスクリーニングを簡便に行う手法の開発とその実用化を目指している。今年度は以下の成績を得た。
1.過酸化水素に対する感受性:カタラーゼ遺伝子正常(Cs^*)及び変異マウス(Cs^b)の肝細胞に様々な濃度のH_2O_2を曝露させ、H_2O_2による細胞毒性が濃度依存的であることが分かった。また、その影響はCs^b>Csの傾向が示され、カタラーゼ活性に依存していたことを示唆した。
2.美白クリームの主成分であるhydroquinoneの細胞毒性の検討:Hydroquinoneを両種マウスの肝細胞に曝露させると濃度依存的に細胞障害が引き起こされ、しかもカタラーゼ活性の低いCsbマウスの方がhydroquinoneに対する感受性が高く、カタラーゼ活性とは関連があることが明らかとなった。その結果を、これまでに得られているカタラーゼ変異遺伝子導入大腸菌を用いた曝露結果と照らし合せ、両者の一致性も明らかとなった。また、蛍光色素Hoechst 33342を用いてhydroquinoneの曝露で両種マウスの肝細胞アポトーシスを検出した。特に400μM hydroquinoneの曝露によるクロマチン凝集の割合が両種マウスの肝細胞とも高く、細胞核の断片化が顕著であった。ただし、両種マウスの肝細胞の間では有意な差異が見られなかった。
3.プロテオーム解析結果:Hydroquinoneを48時間曝露後では、たんぱく質区Major urinary protein 1、ATP synthase subunit delta、およびTranslocon-associated protein subunit deltaが同定され、特にTranslocon-associated protein subunit deltaの発現がCs^bの初代培養肝細胞に上昇したことが分かった。
4.抗酸化物質レスベラトロールのhydroquinone細胞毒性の抑制効果:Hydroquinoneによる細胞毒性がレスベラトロールの添加によって著しく低減され、レスベラトロールがhydroquinone細胞毒性の予防に有効であることを示した。
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[Journal Article] Sensitization to alloxan-induced diabetes and pancreatic cell apoptosis in acatalasemic mice. Biochim Biophys Acta. 2010 ; 1802(2) : 240-6.2010
Author(s)
Kikumoto Y, Sugiyama H, Inoue T, Morinaga H, Takiue K, Kitagawa M, Fukuoka N, Saeki M, Maeshima Y, Wang DH, Ogino K, Masuoka N, Makino H.
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Journal Title
Biochim Biophys Acta.
Volume: 1802(2)
Pages: 240-246
Peer Reviewed
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