2010 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
21390283
|
|---|
| Research Institution | Research Institute, International Medical Center of Japan |
|---|
Principal Investigator |
安田 和基 独立行政法人国立国際医療研究センター, 研究所 糖尿病研究センター 代謝疾患研究部, 部長 (80311611)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岡村 匡史 独立行政法人国立国際医療研究センター, 研究所・ヒト型動物開発室, 室長 (00333790)
|
|---|
| Keywords | 糖尿病 / 遺伝子 / 発現調節 / RNA |
|---|
| Research Abstract |
高度に機能分化したインスリン分泌臓器である膵β細胞は、きわめて特徴的な遺伝子発現調節機構を有することが知られており、その本体の解明は糖を中心とした代謝制御システムや、糖尿病の病態との関係からもきわめて重要である。我々は、ラット膵β細胞株INS-1D細胞(Dr Wollheim、及び関根信夫博士より供与)から、Vector-capping法を用いて世界に先駆けて完全長cDNAライブラリーを作成し、特異的な遺伝子発現調節機構を解析するとともに、新規転写産物、特にmRNA型の新規non-coding-RNA(ncRNA)と細胞機能との関連を検討した。ランダムに拾った約2万クローンについて、5'-側one passシークエンスを行い、新規クローン候補と思われるものについて、second Pass、third passのシークエンス解析を行った。さらに次世代シークエンサー(イルミナ社GAII x)を用いたRNA-Seqを開始しており、その結果との比較検討を開始した。膵β細胞の機能面から興味深い遺伝子のうち、既報と異なる転写開始点TSS (alternative TSS)が同定されたものについて、その5'上流域1-3kbpを「新たな転写調節領域候補」として、in silico解析による転写調節エレメント抽出を行ったのち、その機能、特に栄養素反応性の有無をin vitroプロモーターアッセイにより検討するためのコンストラクトを作成した。また500bp以上のインサートをもちながら明らかなORF (open reading frame)を持たないncRNA候補に注目し、配列特異的なsiRNAを作製してINS-1細胞へ導入した。グルコース反応性インスリン分泌に変化がみられ機能をもつと期待されたクローンについては、ノックダウンによる網羅的な遺伝子発現プロファイルへの影響をマイクロアレイにより検討した。
|
