2009 Fiscal Year Annual Research Report
RNAiコレクションによるエストロゲン応答性G蛋白結合型受容体の網羅的解析
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21590256
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| Research Institution | Yamaguchi University |
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Principal Investigator |
水上 洋一 Yamaguchi University, 総合科学実験センター, 教授 (80274158)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
横溝 岳彦 九州大学, 医学研究院, 教授 (60302840)
岡本 まり子 山口大学, 総合科学実験センター, 助教 (30415111)
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| Keywords | エストロゲン / GPCR / RNAi / 受容体 / 生殖器 |
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| Research Abstract |
女性ホルモンであるエストロゲン(E2)は、細胞増殖やインスリン分泌、血管弛緩、転写因子として機能など多彩な生理作用を有している。その受容体は、核内受容体と細胞膜受容体に分類される。最近、E2の細胞膜受容体が同定されたが、生殖器では受容体が機能していないのではないかという論文が報告されている。
そこで、受容体のすべて遺伝子をノックダウンさせることのできるRNAiコレクションを用いて、これまで解析が不可能だった細胞膜に発現している受容体に対して網羅的な同定解析技術を確立することを目的としている。この方法が確立すれば、生殖器に存在するE2細胞膜受容体の同定とその活性化経路を解明し、女性ホルモン応答性疾患のターゲットを解明することを2番目の目的として研究を行った。
RNAi導入後の活性化を指標に受容体の同定を行うため、生理的条件下でE2刺激における活性化の指標を検討した。リガンド刺激における活性測定では、最も感度が高い細胞表面のインピーダンス測定をした。リガンド刺激後、5分以内では、子宮筋腫由来の培養細胞2種類、乳がん由来の培養細胞ではリガンド刺激の効果を検出することができなかった。このため、RNAiライブライリーの作成と並行して、内因性の受容体検出システムを検討している。E2刺激後の転写活性の変化を新たな指標として検出するシステムを構築しつつあり、このシステムを構築でき次第、受容体のスクリーニングを開始する予定である。
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