エネルギー移行型蛍光プローブによる生存がん幹細胞分離法の診断と治療指標への有用性

2009 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 21590622
• Research Institution: Hamamatsu University School of Medicine
• Principal Investigator: 竹下 明裕 Hamamatsu University School of Medicine, 医学部, 准教授 (00242769)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 大西 一功 浜松医科大学, 医学部附属病院, 教授 (80252170) ; 竹下 香 (新庄 香) 浜松医科大学, 保健管理センター, 特任助教 (30397393)
• Keywords: 肝細胞 / FRET法 / KRAS / mRNA / cell sorter

Research Abstract

これまでの実験で得られた至適donor probeとacceptor probeに、アビジン蛋白を結合させ、導入される色素probeの分子量の設定を試みた。Preliminaryな結果として、高分子化蛍光probeの有用性が示唆された。蛍光物質結合低分子物質は核内まで到達してしまった。核内に集積せず、胞体に局在する至適donor probeとacceptor probeの設定が必要とされる。次にQUAL-FRET法を利用したprobeの設定を行った。KRAS mRNAに対し作製されたprobeの特異性を確認する。培養細胞にdonorおよびacceptor probeとincubateし、キメラRNA陽性細胞でFRET蛍光が上昇することをスペクトロメーター等により解析した。Bcr-ablに関しては、発現が多いとされる細胞においても、蛍光が増強せず、プローブの設定と蛍光感度を再点検することとした。
QUAL-FRET法を利用した癌細胞分離方法の確認特異的蛍光probeの癌細胞(初期実験モデルとしての白血病細胞)への導入とgatingとsortingによる分離効率の調整、そして生細胞率の向上をねらった。これまでの検討では生細胞率と導入効率は逆相関があり、導入効率70%以上を得ながら、本テーマを遂行したい。接着性のある細胞、リンパ球や増殖が顕著な培養細胞ではprobeの導入効率の悪い傾向があり、効率を高めるために生存率が低下することが判明した。neuramidaseやlow Ph等を用いて技術的な向上をはかっていく必要がある。

Research Products

• [Journal Article] CMC-544 (inotuzumab ozogamicin) shows less effect on multidrug resistant cells : analyses in cell lines and cells from patients with B-cell chronic lymphocytic leukaemia and lymphoma (2009)
  • Author(s): Takeshita A, et al.
  • Journal Title: Br J Haematol 146 Pages: 34-43
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] CMC-544 (inotuzumab ozogamicin), an anti-CD22 immuno-conjugate of calicheamicin, alters the levels of target molecules of malignant B-cells (2009)
  • Author(s): Takeshita A, et al.
  • Journal Title: Leukemia 23 Pages: 1329-1336
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Phase I/II study of humanized anti-CD33 antibody conjugated with calicheamicin, gemtuzumab ozogamicin, in relapsed or refractory acute myeloid leukemia : final results of Japanese multicenter cooperative study (2009)
  • Author(s): Kobayashi Y, et al.
  • Journal Title: Int J Hematol 89 Pages: 460-469
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Effective Blood Utilization via System for Massive Blood Transfusion, including Cardiovascular Operation in Local Areas (2009)
  • Author(s): Takeshita A, et al.
  • Journal Title: Jpn J Transfusion Cell Therapy 55 Pages: 63-7
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Collaborative Study Group of Allo-immunity to Antigen Diversity in Asian Populations. Allo-immunity to erythrocytes in relation to blood transfusion and pregnancy ; Cooperative study of allo-immunity to antigen diversity in Asian populations (2009)
  • Author(s): Takeshita A, et al.
  • Organizer: 51th Annual Meeting of the American Society of Hematology
  • Place of Presentation: New Orleans, USA
  • Year and Date: 2009-12-07
• [Presentation] Collaborative study on erythrocyte irregular antibodies in Japan Results from Japanese Study Group of Allo-Immunity to Antigen Diversity in Asian populations (2009)
  • Author(s): Takeshita A, et al.
  • Organizer: 20^<th> Congress of International Society of Blood Transfusion
  • Place of Presentation: Nagoya, Japan
  • Year and Date: 2009-11-15
• [Presentation] Internalization may be important in the efficacy of CMC-544, a new calicheamicin-conjugated anti-CD22 antibody (2009)
  • Author(s): Takeshita A, et al.
  • Organizer: 68^<th> Annual Meeting of the Japanese Cancer Association
  • Place of Presentation: Yokohama, Japan
  • Year and Date: 2009-10-02
• [Presentation] CMC-544, an anti-CD22 immuno-conjugate of calicheamicin, decreases the level of compliment inhibitory factors on malignant B-cell lymphoma cells (2009)
  • Author(s): Takeshita A, et al.
  • Organizer: 14^<th> congress of European Society of Hematology
  • Place of Presentation: Berlin, Germany
  • Year and Date: 2009-06-07