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2011 Fiscal Year Annual Research Report

エネルギー移行型蛍光プローブによる生存がん幹細胞分離法の診断と治療指標への有用性

Research Project

Project/Area Number 21590622
Research InstitutionHamamatsu University School of Medicine

Principal Investigator

竹下 明裕  浜松医科大学, 医学部, 准教授 (00242769)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 大西 一功  浜松医科大学, 医学部附属病院, 教授 (80252170)
Keywords幹細胞 / FRET法 / KRAS / mRNA / cell sorter
Research Abstract

本研究は2つの蛍光probeを近接するRNAと反応させ、energy transfer technologyを使用することで、RNAを細胞内で同定しようとするものである。Probe得られた至適donor probeとacceptor probeに、アビジン蛋白を結合させ、導入される色素probeの分子量の設定を試みた。数種類の蛍光物質を使用し指摘な蛍光probeを作成した。核膜を透過せず胞体内に局在し、目標とするRNAと反応する、至適donor probeとacceptor probeの設定が必要とされる。低分子の蛍光probeでは非特異反応が多く、比較的高分子の蛍光probe作成が必要であった。KRAS mRNAに対し作製されたprobeの特異性を確認した。培養細胞にdonorおよびacceptor probeとincubateし、KRAS mRNA高発現細胞でFRET蛍光が上昇することをスペクトロメーター等により解析した。この結果、特異的な蛍光が観察されたが、、KRAS以外の100,000コピー以下のRNAを標的とした場合十分に蛍光が増強せず、蛍光感度を現在よりも上げる工夫が必要であった。一方で、癌細胞を生きたまま、特異的RNAの発現の有無より分離する方法を検討した。蛍光probeの白血病細胞への導入とgatingとsortingによる分離効率の調整、そして生細胞率の向上をねらった。これまでの検討では生細胞率と導入効率は逆相関があり、K562やNB4を使用した場合は導入効率が70%以上となったが、正常人末梢血のリンパ球ではprobeの導入効率が悪く、導入効率を高めることにより生存率が低下することが判明した。さらにprobeの導入技術の向上をはかっていく必要がある。

  • Research Products

    (5 results)

All 2011

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (2 results)

  • [Journal Article] Phase I trial of gemtuzumab ozogamicin in intensive combination chemotherapy for relapsed or refractory adult acute myeloid leukemia (AML) : Japan Adult Leukemia Study Group (JALSG)-AML206 study2011

    • Author(s)
      Usui N, Takeshita A, et al
    • Journal Title

      Cancer Science

      Volume: 102(7) Pages: 1358-65

    • DOI

      10.1111/j.1349-7006.2011.01957.x

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Impact of additional chromosomal abnormalities in patients with acute promyelocytic leukemia : 10-year results of the Japan Adult Leukemia Study Group APL97 study2011

    • Author(s)
      Ono T, Takeshita A, et al
    • Journal Title

      Haematologica

      Volume: 96(1) Pages: 174-6

    • DOI

      10.3324/haematol.2010.030205

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Medical technologists of the university hospital blood transfusion taking an important role in the education of transfusion medicine2011

    • Author(s)
      Fujihara H, Takeshita A, et al
    • Journal Title

      Jpn J Transfusion and Cell Therapy

      Volume: 57(6) Pages: 470-7

    • DOI

      10.3925/jjtc.57.470

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Efficacy of gemtuzumab ozogamicin (GO) on relapsed/refractory acute promyelocytic leukemia (APL)2011

    • Author(s)
      Takeshita A, et al
    • Organizer
      Annual Meeting of American Society of Hematology
    • Place of Presentation
      San Diego, USA
    • Year and Date
      20111200
  • [Presentation] Allo-Immunity to Erythrocytes in Relation to Blood Transfusion and Pregnancy ; Report from the Asian Cooperative Group2011

    • Author(s)
      Takeshita A, et al
    • Organizer
      30^<th> Annual Meeting of Korean Society of Blood Transfusion
    • Place of Presentation
      Busa, Korea
    • Year and Date
      20110600

URL: 

Published: 2013-06-26  

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