2010 Fiscal Year Annual Research Report
プラークアッセイ法を応用した細胞障害性HCV株のクローン化と機能解析
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21590832
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
大岡 真也 東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 講師 (90361691)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
坂本 直哉 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 寄附講座教員 (10334418)
東 正新 東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 助教 (10376783)
渡辺 守 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (10175127)
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| Keywords | プラークアッセイ / 細胞障害効果 / ヒト肝臓キメラマウス |
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| Research Abstract |
今年度本研究では、ウイルス感染価を定量する基本手技であるプラークアッセイ法をHCV感染系に応用し、細胞障害性プラーク単離の反復を行い、より増殖力・細胞障害性の強いウイルスクローンの単離とその機能解析およびウイルス遺伝子変異の解析を遂行し以下の結果を得た。(1)HCV-JFH1株をHuh-7.5.1細胞感染によるプラーク単離により、高レベルの増殖と著明な細胞死を呈する細胞障害生HCVを単離できた。単離株の遺伝子解析で同定した、NS5Bの5個のアミノ酸変異を導入した変異ウイルスクローンをHun751細胞にトランスフェクションしウイルス増殖粒子形成能を解析したところ、3箇所の変位クローンで親株JFH1より著明に高レベルの粒子産生が観察された。以上より、HCVの特定の遺伝子構造がウイルスの増殖・感染能を規定していることが示された。(2)変異を個々に導入した細胞障害性クローンを感染レセプター欠損Huh7細胞に導入し増殖、粒子分泌レベルを解析したところいずれのクローンも細胞内増殖が著明に亢進しておりウイルス粒子形成・分泌能は野生型と同等であった。(3)3カ所の変異を導入したHCVクローンをヒト肝臓移植キメラマウスに接種したところ変異ウイルスは感染早期に感染早期の血中ウイルスレベルが高値であったが安定期においては野生型と同等のレベルになり変異が消失した野生ウイルスが増加した。次年度以降においては、急性重症型C型肝炎、肝移植後再発肝炎症例より新たな細胞障害性HCVを構築しHCVの細胞障害効果の解析を進める。
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