2011 Fiscal Year Annual Research Report
FLT3分子の糖鎖修飾と細胞内局在に基づく標的阻害効果増強法の検討
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21591198
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
清井 仁 名古屋大学, 医学系研究科, 准教授 (90314004)
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| Keywords | FLT3 / チロシンキナーゼ / 糖鎖修飾 / 細胞内局在 / 阻害剤 / 併用療法 / 白血病 |
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| Research Abstract |
本研究においては、正常及び変異FLT3分子が小胞体(ER)からゴルジネットワーク(GN)を経て糖鎖修飾を受け、細胞表面へ発現される分子機構の相違と、その結果生じている変異FLT3分子め細胞内局在部位の同定をリン酸化状態と活性化シグナル伝達機構との関連性を考慮する中で明らかにし、糖鎖修飾、細胞内局在の相違に基づき、変異FLT3分子に対するキナーゼ阻害剤の標的効果を増強する併用療法のコンセプトを確立することを目的としている。今年度は下記の研究成果を得た。
・タンパクのERからGolgiへの移動を阻害し、GolgiからERへの移動は阻害しないBrefeldin A(BFA)処理により、FLT3分子の細胞表面発現量をフローサイトメーターで定量した。正常FLT3発現細胞では、細胞表面発現量が著明に低下したが、変異FLT3分子の減少量は僅かであった。
・BFA処理後、正常FLT3発現細胞では、FLT3下流の標的分子であるSTATI,STAT3,STAT5の活性化抑制が認められたが、変異FLT3発現細胞においてはこれら分子の活性化抑制は認められなかった。一方、AKTおよびERKの活性化は、正常FLT3発現細胞においてもBFAによる抑制を受けなかった。
・BFAの正常および変異FLT3発現細胞に対する増殖抑制効果をMTT法にて評価した。正常FLT3発現細胞においては、FLによる細胞死抑制効果をBFAは著明に阻害し、高度に細胞死を誘導した。一方、変異FLT3発現細胞においてはBFAによる細胞死誘導は軽度であった。
以上の結果により、正常FLT3分子においては、その複合糖鎖修飾が細胞内外からのFL刺激に対しての自己リン酸化に重要であること、変異FLT3分子においては、複合糖鎖修飾を受ける前にすでに自己リン酸化しており、STAT分子のリン酸化を介して細胞増殖に寄与していることが明らかとなった。
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[Journal Article] Molecular lesions in childhood and adult acute megakaryoblastic leukaemia2012
Author(s)
Hama A, Muramatsu H, Makishima H, Sugimoto Y, Szpurka H, Jasek M, OKeefe C, Takahashi Y, Sakaguchi H, Doisaki S, Shimada A, Watanabe N, Kato K, Kiyoi H, Naoe T, Kojima S, Maciejewski JP.
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Journal Title
Br J Haematol
Volume: 156
Pages: 316-325
Peer Reviewed
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[Presentation] AML study in JALSG2011
Author(s)
Hitoshi Kiyoi
Organizer
The Korean Society of Hematology KSH and JALSG joint symposium
Place of Presentation
Asan Medical Center (Seoul, Korea)(招待講演)
Year and Date
2011-05-26
