| Research Abstract |
マウス胚性幹細胞(ES細胞)を試験管内で血液細胞へ分化させる手法を用いて,赤血球系前駆細胞における,組織・細胞系列固有のエピジェネティクスパターン成立のメカニズムについての研究を行った.いくつかの遺伝子に関して,(1)mRNA発現,(2)ヒストンアセチル化,(3)ヒストンメチル化,(4)DNAメチル化の解析をおこなっている.マクロファージや好中球の分化に関与している遺伝子に関して,野生型の赤血球系前駆細胞では,mRNA発現の抑制・ヒストンH4の脱アセチル化が認められ,ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤により,mRNA発現抑制の解除が認められている.また,赤血球分化に必須な転写因子GATA-1を欠損した赤血球系前駆細胞では,いくつかのマクロファージや好中球の分化に関与している遺伝子に関して,mRNA発現持続・ヒストンH4の脱アセチル化解除が認められ,今後,それらの遺伝子の転写調節領域におけるGATA-1の結合を,クロマチン免疫沈降などにより調べる予定である.
赤血球系前駆細胞において,GATA-1と結合しているタンパクを同定するために,細胞内でビオチンリガーゼにより,ビオチン化されるアミノ酸配列を付加したGATA-1(bioGATA-1)を作成した.さらに,抗生物質テトラサイクリンにより,外来性遺伝子の発現量を制御できるTET-OFFシステムを用いて,GATA-1欠損Es細胞へbioGATA-1を遺伝子導入し,細胞株を樹立した.今後,このEs細胞株を用いて,ES細胞から赤血球系前駆細胞までの各分化段階でbioGATA-1タンパクを発現させ,ストレプトアビジンを利用したプルダウンにより,bioGATA-1に結合するタンパクを精製する予定である.
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