2010 Fiscal Year Annual Research Report
エネルギー代謝とラジカルスカベンジ能からみたCV-159の脳保護作用
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21591976
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| Research Institution | Oita University |
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Principal Investigator |
徳丸 治 大分大学, 医学部, 准教授 (40360151)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
黒木 千尋 大分大学, 医学部, 助教 (30392715)
北野 敬明 大分大学, 医学部, 教授 (20211196)
横井 功 大分大学, 医学部, 教授 (80150366)
古賀 寛教 大分大学, 医学部, 医員 (50468013)
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| Keywords | 病態生理学 / 核磁気共鳴法 / 脳虚血 / 脳保護 / 電子スピン共鳴法 / CV-159 / クレアチンリン酸 / ATP |
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| Research Abstract |
【^<31>P-NMRによる脳エネルギー代謝の測定】(担当:徳丸,黒木・北野)
エーテル麻酔下にラットを断頭,速やかに大脳スライスを作成し,酸素化した10mMブドウ糖加人工脳脊髄液(ACSF)で灌流し,^<31>Pを観測核とする核磁気共鳴法(^<31>P-NMR)によりスペクトルを測定した。この実験系の標本作製や灌流系,^<31>P-NMR測定について,恒常的に改良を行った。
【CV-159よるに神経保護作用の脳虚血-再灌流モデルを用いた検討】(担当:徳丸・黒木・北野)
ACSFに10nM～10μMのCV-159を添加した群(添加群)と対照群とで,脳スライスに対する虚血-再灌流負荷前後の脳スライス中の高エネルギーリン酸であるクレアチンリン酸(PCr)の回復を比較した。いずれの濃度でも,添加群と対照群との間にPCrの回復に差は認められなかった。CV-159の濃度による回復の差も認められなかった。
CV159は水に難溶性であり,灌流用チューブや試験管に吸着し易いことが原因と考えられる。
【電子スピン共鳴法によるCV159のラジカルスカベンジ能の測定】(担当:横井・古賀)
電子スピン共鳴法(ESR)を用いてCV-159のhydroxylラジカルスカベンジ能を測定しようと試みているが,上記のように水に難溶性であるため,未だ安定した測定ができていない。測定法を鋭意工夫中である。
【ルシフェリン/ルシフェラーゼ法によるATPの測定】(徳丸・黒木)
高エネルギーリン酸であるATPは^<31>P-NMRにより定量できるが,脳組織中の含有量がPCrと比較して少ないため,スペクトルのS/N比が小さく,定量が困難である。そこで代替手段としてルシフェリン/ルシフェラーゼ法のキットによるATPの測定を導入した。健常組織での測定を行い,妥当性を確認した。
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