2010 Fiscal Year Annual Research Report
鉄硫黄クラスター合成を担う多成分コア複合体の作動機構と分子ダイナミズムの構造基盤
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21770112
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
和田 啓 大阪大学, 大学院・理学研究科, 助教 (80379304)
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| Keywords | 鉄硫黄クラスター / X線結晶構造解析 / ATP分解酵素 / SUFマシナリー / ISCマシナリー |
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| Research Abstract |
本研究の目的である多成分複合体によるFe-S クラスター合成機構および機能調節機構の解明に向けて、平成22年度は以下の項目を実施した。
1.Fe-Sクラスター合成に関わるタンパク質複合体の調製
前年度までに、Fe-Sクラスター合成に関わるタンパク質複合体(SufB-SufC-SufD複合体)に形成されるFe-S クラスター中間体を捕捉に成功した。今年度は、この複合体にさらにフラビン(FAD)が結合した状態の捕捉・精製を試みた結果、嫌気条件(無酸素条件)かつ光還元条件下で、SufB-SufC-SufD複合体はFADと結合することを確認した。
2.Fe-S クラスター合成における電子供与体fdxの発現・精製
前年度に同定したIscS-IscU複合体には、Fe-Sクラスターをもつ電子供与体フェレドキシン(fdx)が結合することを予想している。そこで、大腸菌におけるfdx発現とその精製を試み、高純度のfdxを得た。
3.多成分複合体のX線結晶構造解析
精製条件を確立したFe-Sクラスター合成に関わる複合体タンパク質(SufB-SufC-SufD複合体、SufB-SufC複合体、IscS-IscU複合体およびIscS-IscU-fdx複合体)の結晶化条件を探索した。このうち、IscS-IscU複合体について良質な結晶を得た。大型放射光施設SPring-8において回折X線測定し、IscS-IscU複合体結晶については3.3A分解能の強度データを収集した。さらに、この複合体結晶には鉄原子が結合していることをX線吸収スペクトルにより明らかにした。
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[Journal Article] Expression, purification and preliminary X-ray crystallographic analysis of the cyanobacterial biliverdin reductase2011
Author(s)
Watanabe, A., Hirata, K., Hagiwara, Y., Yutani, Y., Sugishima, M., Yamamoto, M., Fukuyama, K., Wada K.
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Journal Title
Acta Crystallograph.Sect.F Struct.Biol.Cryst.Commun.
Volume: F67
Pages: 313-317
Peer Reviewed
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