2022 Fiscal Year Annual Research Report
Reveal of the pathogenesis of MPO-ANCA-associated vasculitis and development of novel therapeutic strategies
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21H02958
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
石津 明洋 北海道大学, 保健科学研究院, 教授 (60321957)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
益田 紗季子 北海道大学, 保健科学研究院, 講師 (10763617)
外丸 詩野 北海道大学, 大学病院, 准教授 (20360901)
中沢 大悟 北海道大学, 大学病院, 助教 (60724135)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | MPO-ANCA / Fc受容体 / 活性酸素 / 好中球細胞外トラップ / モノクローナル抗体 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
①MPO-ANCAはどのように好中球を活性化するのかについて、ANCAはFab部分で細胞表面のMPOを架橋し、Fc部分でFc受容体に結合することで好中球を活性化し、それには細胞表面のMPOの架橋により細胞内に伝達されるシグナルと、Fc受容体から細胞内に伝達されるシグナルの両方が作動していることを確認した。MPO-ANCAが好中球に入れる刺激を活性酸素（reactive oxygen species: ROS）の産生を指標として検出する実験系を構築し、Fc受容体を阻害剤（Fcブロッカー）でブロックした時に、ROSの産生がどの程度減少するかによって、MPO-ANCAを抗原刺激優位型とFc受容体刺激優位型に分類できる（FcブロッカーによりROSの産生が50%以上抑制された場合をFc受容体刺激優位、ROSの産生抑制が50%未満の場合を抗原刺激優位型に分類できる）ことを確認した。
②MPO-ANCAにより誘導される好中球細胞外トラップ（neutrophil extracellular traps: NETs）に血管炎惹起性はあるかについて、標的細胞のLDH放出を指標とするアッセイ系を確立した。
③MPO-ANCA関連血管炎（MPO-AAV）におけるNETs除去障害の原因は何かについて、NETsに分解抵抗性を付与するタンパクとして5つの候補を絞り込み、そのうちの1つについてはその活性を確認した。また、そのタンパクの作用を阻害するモノクローナル抗体を作製し、同抗体がin vitroでDNase Iに対する分解抵抗性を有するNETsの形成を抑制することを確認した。必要量のモノクローナル抗体の精製も完了している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
①MPO-ANCAはどのように好中球を活性化するのか、③MPO-ANCA関連血管炎（MPO-AAV）におけるNETs除去障害の原因は何かについて、研究は計画通り進行している。②MPO-ANCAにより誘導される好中球細胞外トラップ（NETs）に血管炎惹起性はあるかについて、標的細胞の培養系確立に若干時間を要したが、実験を実施できる体制が整ってきている。以上より、研究はおおむね順調に進展していると言える。
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| Strategy for Future Research Activity |
①MPO-ANCAはどのように好中球を活性化するのかについて、個々のMPO-ANCAが好中球に入れる刺激が、抗原とFc受容体のどちらから優位に入るのか、また、抗原から入るシグナルとFc受容体から入るシグナルのどちらがより病態に密接に関与しているのかは不明である。そこで、2023年度は、どちらのシグナルがより重要なのか、MPO-ANCAを抗原刺激優位型とFc受容体優位型に分類し、臨床指標との関連を解析することにより明らかにする。
②MPO-ANCAにより誘導される好中球細胞外トラップ（NETs）に血管炎惹起性はあるかについて、標的細胞のLDH表出を指標とするアッセイ系を確立し、NETsの血管炎惹起性を立証する。
③MPO-ANCA関連血管炎（MPO-AAV）におけるNETs除去障害の原因は何かについて、2022年度までにNETsに分解抵抗性を付与するタンパクとして5つの候補を絞り込み、そのうちの1つについてはその活性を確認した。現在、そのタンパクの作用を阻害するモノクローナル抗体を作製し、in vitroでの分解抵抗性NETs形成に対する抑制作用を確認している。今後、in vivoモデルに対し、作製したモノクローナル抗体のNETs関連病原性に対する予防効果を検証する。
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