2021 Fiscal Year Research-status Report
糖鎖分解酵素NEU1による脂肪分解抑制のメカニズムの解明
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21K06550
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| Research Institution | Teikyo University |
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Principal Investigator |
根岸 文子 帝京大学, 薬学部, 准教授 (40177902)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大藏 直樹 帝京大学, 薬学部, 准教授 (60349256)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | シアリダーゼ阻害活性阻害剤 / 3T3-L1脂肪細胞 / DANA / ZANA / 脂肪分解 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
シアル酸誘導体は、水溶性部分と脂溶性部分のバランスが良く多彩な生理活性を持つため、医薬品の新素材として期待されている。申請者は、肥満マウスの脂肪組織では、NEU1が正常マウスに比べ高い活性を示すことを明らかにし、NEU1の異常が肥満の病態発症に関連することを報告した(Kihara-Negishi F. et al. Biol. Pharm. Bull. 36:1027-1031, 2013)。2021年度は、シアリダーゼ阻害活性を持つシアル酸誘導体であるDANAとNANAが脂肪分解を促進するかを、マウス3T3-L1脂肪細胞をイソプロテレノールを用いて刺激を行った場合の培地中のグリセロール濃度を定量し調べた。具体的には、これらの阻害剤の処理の時期（前処理あるいはイソプロテレノールと同時処理）、時間（４時間あるいは２４時間）、濃度について検討を進めた。現在、まだ実験条件の検討を継続中である。シアル酸誘導体は、水溶性部分と脂溶性部分のバランスが良く多彩な生理活性を持つため、医薬品の新素材として期待されている。申請者は、肥満マウスの脂肪組織では、NEU1が正常マウスに比べ高い活性を示すことを明らかにし、NEU1の異常が肥満の病態発症に関連することを報告した(Kihara-Negishi F. et al. Biol. Pharm. Bull. 36:1027-1031, 2013)。2021年度は、シアリダーゼ阻害活性を持つシアル酸誘導体である“DANA“と“NANA“ が脂肪分解を促進するかを、マウス3T3-L1脂肪細胞をβアドレナリン刺激であるイソプロテレノールで刺激を行った場合の培地中のグリセロール濃度を定量し調べた。具体的には、これらの阻害剤の処理の時期（前処理あるいはイソプロテレノールと同時処理）、時間（４時間あるいは２４時間）、濃度について検討を進めた。現在、まだ実験条件の検討を継続中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
次年度は、本年度の研究において確定した実験条件を用い、シアリダーゼ阻害活性を持つシアル酸誘導体が脂肪分解を促進するかについての実験計画を遂行できると思われる。
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| Strategy for Future Research Activity |
本年度の研究において確定した実験条件を用い、シアリダーゼ阻害活性を持つシアル酸誘導体DANAとNANAが脂肪分解を促進するかについて明確な結果を示す。また、シアリダーゼ阻害剤の中でも、NEU1の活性を特異的に阻害するC9-butyl-amide-DANAについても、脂肪分解の促進活性について検討する。
また、マウスペリリピン１のタグ付き発現ベクターが入手出来たので、マウス3T3-L1脂肪細胞に導入し、ペリリピン１の脱シアリル化部位を質量分析にて同定する。
さらに、ヒトNEU1の野生型とシアリダーゼ活性欠損株をアデノウィルスベクターとして入手できる予定なので、これらを用いて１．ペリリピン１の脱シアリル化部位を同定する ２．シアリダーゼ活性がペリリピン１のリン酸化の変動と、ペリリピン１とHSリパーゼおよびペリリピン１とNEU1の脂肪滴上での結合（免疫沈降法と免疫染色法）、HSリパーゼ活性に与える影響を検討する。
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| Causes of Carryover |
実験系を確立中であったため。
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