幹細胞表面特異的糖鎖を標的とした膵癌の新規治療法の開発

2022 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 21K08764
• Research Institution: Tokyo Metropolitan Geriatric Hospital and Institute of Gerontology
• Principal Investigator: 五味 不二也 地方独立行政法人東京都健康長寿医療センター(東京都健康長寿医療センター研究所), 東京都健康長寿医療センター研究所, 研究員 (40205620)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 進士 誠一 日本医科大学, 医学部, 講師 (80409193) ; 佐々木 紀彦 地方独立行政法人東京都健康長寿医療センター(東京都健康長寿医療センター研究所), 東京都健康長寿医療センター研究所, 研究員 (80639063) ; 石渡 俊行 地方独立行政法人東京都健康長寿医療センター(東京都健康長寿医療センター研究所), 東京都健康長寿医療センター研究所, 研究部長 (90203041)
• Project Period (FY): 2021-04-01 – 2025-03-31
• Keywords: 膵癌細胞 / nestin / 表面糖鎖

Outline of Annual Research Achievements

凍結保存していた、nestinを強制発現させたMIAPaCa-2とPK-8細胞を解凍した後、1~2継代し、RT-PCR法によりnestinの発現を再確認した。MIAPaCa-2およびPK-8のnestin強制発現細胞はmock細胞に対して、nestin mRNAがともに約2.5倍程度高かった。これらの細胞を用いて細胞表面の糖鎖解析を行なった。凍結サンプルから疎水性画分を抽出して膜成分とし、レクチンマイクロアレイを行ない、Glycostation Readerにより解析した。
Nestin強制発現により、MIAPaCa-2細胞ではDSAに反応する（GLｃNAcbeta1-4)nが減少し、分枝構造が減っていると考えられた。PK-8細胞ではHHLに反応する高マンノース鎖が減少していた。Nestin強制発現によって2種類の細胞に共通する糖鎖構造の変化は見られなかった。理由としては細胞質に発現するnestinが細胞表面の糖鎖の変化を引き起こし難いことや、強制発現したnestinの発現量が少ないことが考えられた。一方で、細胞間では表面糖鎖の特徴は大きく異なっており、それぞれの細胞の特徴を示していることが考えられた。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

予定通りに、nestin強制発現した膵癌細胞膜成分をレクチンマイクロアレイにかけ、Glycostation Readerにより解析を行なうことができた。

Strategy for Future Research Activity

十分にnestinの発現が高い同じ凍結細胞からsphereを作成し、nestinや他の膵癌幹細胞のマーカーと思われる分子に対する抗体で染色、nestin過剰発現により幹細胞が増えるかどうかの確認を行う。十分に幹細胞が増えているとするならば、sphereを材料に糖鎖解析へ進む。
もしくは、nestin過剰発現により糖転移酵素の発現に変化がないかを検討する。

Causes of Carryover

必要物品価格と予算額の差が生じたため、必要物品購入額へ加算することとした。

Research Products

• [Journal Article] Multiple cystic sphere formation from PK-8 cells in three-dimensional culture. (2022)
  • Author(s): Shichi Y, Gomi F, Ueda Y, Nonaka K, Hasegawa F, Hasegawa Y, Hinata N, Yoshimura H, Yamamoto M, Takahashi K, Arai T, Ishiwata T
  • Journal Title: Biochem Biophys Rep Volume: 32 Pages: 101339
  • DOI: 10.1016/j.bbrep.2022.101339.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Gp130-Mediated STAT3 Activation Contributes to the Aggressiveness of Pancreatic Cancer through H19 Long Non-Coding RNA Expression. (2022)
  • Author(s): 2.Sasaki N, Hirano K, Shichi Y, Gomi F, Yoshimura H, Matsushita A, Toyoda M, Ishiwata T.
  • Journal Title: Cancers (Basel). Volume: 14 Pages: 2055
  • DOI: 10.3390/cancers14092055.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Epithelial and Mesenchymal Features of Pancreatic Ductal Adenocarcinoma Cell Lines in Two- and Three-Dimensional Cultures. (2022)
  • Author(s): 3.Shichi Y, Gomi F, Sasaki N, Nonaka K, Arai T, Ishiwata T.
  • Journal Title: J Pers Med. Volume: 12 Pages: 746
  • DOI: 10.3390/jpm12050746.
  • Peer Reviewed / Open Access