2022 Fiscal Year Research-status Report

胆汁酸合成酵素CYP7A1を介した高血圧と高脂肪食のNASH発症・進展相互作用

Research Project

Project/Area Number	21K10406
Research Institution	Kinjo Gakuin University
Principal Investigator	内藤久雄金城学院大学, 生活環境学部, 教授 (90547556)
Project Period (FY)	2021-04-01 – 2024-03-31
Keywords	NASH / 肝線維化 / 高血圧 / プロテオーム
Outline of Annual Research Achievements	先行研究により、高脂肪・高コレステロール飼料（HFC）摂取により引き起こされるラットの肝炎・線維化は、肝臓内への胆汁酸の蓄積が壊死・線維化に進展していることが判明しており、その要因の一つとして高血圧がある。昨年度行った実験のうちの　②　8週齢の雄SHR/Ismを4群(各群6匹)に分け、2群に降圧剤ヒドララジン(60 mg/L)を2週間投与（順化）し、残りの2群は通常飼料のみとする。10週齢に達したところで、a) 降圧剤+HFC群、b) 降圧剤+コントロール飼料群、c) HFC群、d)コントロール飼料群とし、8週後(18週齢)で解剖し、各肝臓サンプル(各群4サンプル使用）から、RIPA Bufferを用いて肝ホモジネートを作成した。次に各ホモジネートを蛋白濃度を測定し、調整後、藤田医科大学にある次世代質量分析装置(Orbitrap fusion)でプロテオーム解析を行った。プロテオーム解析により、高血圧・脂質摂取による肝炎・線維化と関連するマーカーを探索し、近年NASH（肝がん）の新規バイオマーカーとして注目されているCD44が検出され、HFC8週摂取群はコントロール8週摂取群より100倍以上高値であった。また、降圧剤によりHFC+降圧剤群/HFC群比は0.75とやや改善傾向を認めた。しかし、主成分分析から各群の傾向をみたところ、降圧剤の影響は小さかったが、詳細な解析はまだ行っていない。次年度に解析してく予定である。また、解析により抽出された蛋白について、Western Blot法により、各群6匹での解析を行っていく。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 4: Progress in research has been delayed. Reason コロナ感染症における教育関係の対応など負担が多くなり、実験をする時間の確保が難しかった。
Strategy for Future Research Activity	今後は、昨年度報告した実験①の幼少期ラットの肝臓サンプルからDNAを抽出し、次世代シークエンサーにてCyp7a1プロモーター領域のDNAメチル化頻度の解析を行う。また、プロテオーム解析について、高血圧の有無による差が小さいため詳細な解析を今後行い、降圧剤に関連して変化ったのあった蛋白の解析を行っていく。
Causes of Carryover	実験及びその解析が遅れており、実験に必要な試薬・消耗品を購入していないため。