2023 Fiscal Year Research-status Report
法科学的体液資料を網羅する汎用性の高い体液の識別検査法の確立
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21K10538
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| Research Institution | National Research Institute of Police Science |
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Principal Investigator |
阿久津 智子 科学警察研究所, 法科学第一部, 室長 (50356151)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
櫻田 宏一 東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 教授 (10334228)
横田 勲 北海道大学, 医学研究院, 准教授 (20761414)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | mRNA / マルチプレックスRT-PCR法 / TaqMan RT-qPCR法 / 網羅的 / 月経血 / 鼻汁 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
昨年度までの検討で、鼻汁mRNAマーカーを含めた網羅的マルチプレックス化は困難と考えられたため、月経血マーカーについては、その汎用性を考慮し、膣液および血液マーカーとのマルチプレックスRT-PCR系（Menst-Vaginal-Blood Multiplex）を構築することとした。
TaqMan RT-qPCR法により、検出性および特異性が高いことを確認した月経血マーカー3種に、膣液マーカー5種、血液マーカー3種及びリファレンスマーカー1種を加え、分離改善のためのプライマー配列の変更および増幅バランス改善のためのプライマー濃度の最適化を経て、各マーカーに対して陽性判定カットオフ値を設定した。
構築したMenst-Vaginal-Blood Multiplexについて、各種体液試料を用いて特異性を検証したところ、標的体液に対するマーカーが2種類以上陽性の場合に、月経血、膣液および末梢血を特異的に識別可能であった。本手法は、性犯罪の立証において、TaqMan RT-qPCR法による月経血マーカーの検出と比較して、膣液あるいは末梢血の混入を確認できる点が優れていると考えられた。
Menst-Vaginal-Blood MultiplexおよびTaqMan RT-qPCR法は、希釈試料からの検出性がほぼ同等であり、月経血に唾液または精液が混入した試料においても問題なく月経血の判定が可能であった。しかし、両検査系ともに、陳旧試料においては、特に湿度の影響により、いずれのマーカーも検出性が低下したため、陳旧試料への適用を考慮すると、mRNAよりも堅牢なマーカーを用いた検査系の構築も重要であると考えられた。
鼻汁については、新たなマーカーの同定には至らなかったが、mRNAでは検出性が低いBPIFA1のタンパクマーカーについて、ELISA法による検出系を構築した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
研究実施計画のうち、令和5年度は
④鑑定実務を想定した各種試料を用いた検証
を実施予定であり、そのうち、微量、斑痕、分解、混合試料等を用いたMenst-Vaginal-Blood MultiplexおよびTaqMan RT-qPCR法の適用範囲の検証を実施したが、併せて実施予定であった、Menst-Vaginal-Blood Multiplexによる血痕の由来や出血部位推定の検証については、様々な由来の血液試料の収集が難航し、十分な検証を実施できなかったため。
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| Strategy for Future Research Activity |
様々な由来の血液試料を収集し、Menst-Vaginal-Blood Multiplexにより、血痕の由来や出血部位推定が可能か検証を行う。各種法科学的試料の模擬試料を作成し、Menst-Vaginal-Blood Multiplexの適用範囲や限界を把握する。
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| Causes of Carryover |
様々な由来の血液試料の収集が難航し、Menst-Vaginal-Blood Multiplexによる血痕の由来や出血部位推定の検証に使用予定であったPCR増幅やキャピラリー電気泳動用の試薬を購入しなかったため。また、鼻汁についても、新たなマーカーの同定には至らず、検出系の構築に必要な試薬を購入しなかったため。
令和6年度は、血痕の由来や出血部位推定の検証に必要な消耗品を購入する。
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