2023 Fiscal Year Annual Research Report
膵癌における糖脂質代謝異常と発癌メカニズム、癌の進展に注目した革新的治療法の開発
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21K16390
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| Research Institution | Jikei University School of Medicine |
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Principal Investigator |
安田 淳吾 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助教 (90896870)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | Lysosome酵素 / ミトコンドリア / オートファジー |
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| Outline of Annual Research Achievements |
まずGBA酵素活性とタンパク質発現量の評価を行った。膵臓癌細胞株と正常膵管細胞に関してGBA酵素活性を測定し、癌細胞株間での酵素活性の相違が、GBA蛋白発現量との相関を示した。またsiRNA法を用いてGBAをノックダウンし、GBA酵素活性と蛋白発現量が有意な減少を確認GBA酵素活性の大きさにかかわらず、細胞増殖抑制効果を認め、同時にアポトーシス細胞の増加、アポトーシスシグナルの増強を認めた。
膵癌株においてGBAノックダウンによる形態学的評価を行った各細胞株で膨化したミトコンドリアの蓄積が確認され、蛍光顕微鏡下でのミトコンドリアの蓄積と、ライソソーム活性の低下も確認された。、細胞内の活性酸素種(ROS)を評価したところ、細胞内、ミトコンドリア内でのROSの蓄積が確認されミトコンドリアの機能不全が示唆された。ミトコンドリア膜電位をフローサイトメトリーを行い、膜電位の低下を認め、不良ミトコンドリアであることが示された。不良ミトコンドリアの蓄積の原因の評価に、マイトファジー機構を検索した。蛍光顕微鏡においてマイトファジーを評価した。フローサイトメトリーと免疫蛍光染色のいずれでも、GBAノックダウンによりマイトファジー活性が低下していた。その評価のためオートファジー関連蛋白質の発現をウエスタンブロッティングで行ったところ、LC3II蛋白質の蓄積を認めた。マイトファジー阻害材である mdivi-1を用いPDAC細胞株においてアポトーシス細胞を誘導した。mdivi-1単独と比較して、GBAノックダウンとの組み合わせは、マイトファジーを有意に抑制した。
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Research Products
(5 results)
