2023 Fiscal Year Annual Research Report
非アルコール性脂肪性肝疾患の治療に資するホスホリパーゼCの解明
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21K19327
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
河野 望 東京大学, 大学院薬学系研究科(薬学部), 准教授 (50451852)
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| Project Period (FY) |
2021-07-09 – 2024-03-31
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| Keywords | ホスホリパーゼC / ホスファチジルイノシトール / 非アルコール性脂肪性肝疾患 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
LPIAT1を欠損したHuh-7細胞は、LPIAT1欠損マウス肝臓と同様にアラキドン酸含有PI の減少とオレイン酸含有PI の増加、中性脂質の蓄積がみられる。この細胞に[14C]グリセロールを添加し、[14C]ラベルされたPI の分解を経時的に調べると、LPIAT1 KO 細胞では野生型に比べてPI の分解が顕著に亢進する。このPI分解の亢進において、分解されるPIに分子種特異性があるか調べるために、d8グリセロールラベルによる標識PIのLC-MSでの検出系を確立した。この分析系を用いて、PIの分解を分子種レベルで調べた結果、アラキドン酸を含むPI分子種は半減期が長いのに対し、アラキドン酸を含まないPI分子種は半減期が短かった。このことから、PIの分解には分子種特異性があることがわかった。次に[14C]グリセロールを用いた細胞レベルでのPI 分解アッセイを利用して、RNAi スクリーニングをおこなった。候補分子として、Huh-7で発現が確認されたPLCファミリー、PI-PLC活性が報告されているPLCXDファミリーおよびSMSr、およびPIサイクルに関わるNir2, Nir3を対象とした。その結果、どの遺伝子の発現抑制によってもLPIAT1 KO細胞での[14C]PIの分解が抑制されなかった。以上から、LPIAT1 KO細胞でPIの分解を担う分子は既知のPI-PLCではないことが示唆された。そこで次に、各種阻害剤を添加し、PI分解を抑制する化合物をスクリーニングした。その結果、PLCの一般的な阻害剤であるU73122やリソソームの酸性化を抑制するクロロキンではLPIAT1 KO 細胞におけるPI分解の亢進を抑制できなかった。一方で、脂質のホスファターゼを抑制する阻害剤の1つがLPIAT1 KO 細胞におけるPI分解の亢進を抑制することを見出した。
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[Journal Article] Cell density-dependent membrane distribution of ganglioside GM3 in melanoma cells2023
Author(s)
Murate M, Yokoyama N, Tomishige N, Richert L, Humbert N, Pollet B, Makino A, Kono N, Mauri L, Aoki J, Sako Y, Sonnino S, Komura N, Ando H, Kaneko MK, Kato Y, Inamori KI, Inokuchi JI, Mely Y, Iwabuchi K, Kobayashi T
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Journal Title
Cellular and Molecular Life Sciences
Volume: 80
Pages: 167
DOI
Peer Reviewed
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