2021 Fiscal Year Research-status Report
ROCKシグナルを標的とした犬悪性黒色腫の新規治療法の探索
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21K20614
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
高橋 洋介 東京大学, 大学院農学生命科学研究科(農学部), 特任研究員 (50912549)
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| Project Period (FY) |
2021-08-30 – 2023-03-31
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| Keywords | 犬 / 腫瘍 / 悪性黒色腫 / ポドプラニン / Rho kinase / 分子標的薬 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、申請者が同定した犬悪性黒色腫の新規治療標的である「PDPN-ROCKシグナル」の阻害による新たな全身療法の確立を目指した前臨床研究を行う。
本年度は、PDPNを高発現する犬悪性黒色腫細胞株2株を用いて、PDPNのノックアウト実験を行い、PDPN欠損株の機能変化およびシグナル変化、網羅的遺伝子発現変化の検証を行ってきた。その結果、PDPN欠損株のトランスウェルアッセイ、マトリゲルアッセイ、WST1増殖アッセイ、AnnexinV FACS染色法を用いた解析により、移動能、浸潤能、増殖能が有意に低下し、アポトーシス細胞率が有意に上昇していることを明らかにした。さらに、PDPN欠損株を免疫不全マウス(BALB/c nu/nu)に移植したところ、腫瘍の成長が有意に抑制された。ウェスタンブロットを用いたPDPN欠損株のシグナル解析では、ROCKシグナル(p-MYPT1, p-MLC2)およびERK, p38, JNKなどのMAPK(mitogen-activated protein kinase)経路分子の活性化の低下が認められた。網羅的遺伝子発現変化については、現在、RNAシークエンス解析が完了し、得られたデータの解析を行なっている。
上記実験結果より、犬悪性黒色腫において、PDPNおよびROCKシグナルを介した移動能、浸潤能、増殖能の獲得が示唆されたことから、犬悪性黒色腫細胞株にROCK阻害剤3剤(Fasudil, Y-27632, GSK269962A)の添加を行ったところ、PDPN欠損株と同様に移動能、浸潤能、増殖能の低下およびアポトーシスの誘導が認められた。現在、ROCK阻害剤添加時のシグナル変化の解析やin vivo実験の準備を進めている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
初年度、in vitro実験を主に進め、PDPNシグナルの下流にROCKが存在し、犬悪性黒色腫細胞株の移動能、浸潤能、増殖能を担っていること、また、ROCK阻害剤によりそれらを阻害できることを明らかにできたため。
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| Strategy for Future Research Activity |
PDPN欠損株のRNAシークエンスデータの解析を進めるとともに、ROCK阻害剤を添加した際のin vitroでの機能やシグナル変化の詳細解析およびin vivo抗腫瘍効果の検証を進める。
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[Journal Article] Expression of podoplanin in various types of feline tumor tissues2021
Author(s)
KAMOTO Satoshi、SHINADA Masahiro、KATO Daiki、TSUBOI Masaya、YOSHIMOTO Sho、YOSHITAKE Ryohei、ETO Shotaro、IKEDA Namiko、TAKAHASHI Yosuke、HASHIMOTO Yuko、CHAMBERS James、UCHIDA Kazuyuki、YAMADA Shinji、KANEKO Mika K.、NISHIMURA Ryohei、KATO Yukinari、NAKAGAWA Takayuki
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Journal Title
Journal of Veterinary Medical Science
Volume: 83
Pages: 1795～1799
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Presentation] Podoplanin promotes the tumor growth of canine malignant melanoma via Rho-associated kinase signals2021
Author(s)
Masahiro Shinada, Daiki Kato, Namiko Ikeda, Toshio Li, Yuka Kodera, Masaya Tsuboi, James Chambers, Kazuyuki Uchida, Yukinari Kato, Ryohei Nishimura, Takayuki Nakagawa.
Organizer
第80回日本癌学会学術総会
