2013 Fiscal Year Annual Research Report
原発性免疫不全症における遺伝子変異の修復による自己細胞再生療法の開発
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22249043
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
原 寿郎 九州大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (40150445)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
高田 英俊 九州大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (70294931)
井原 健二 九州大学, 大学病院, 准教授 (80294932)
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| Project Period (FY) |
2010-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | BTK遺伝子 / CD34陽性造血幹細胞 / iPS細胞 / アデノ.AAV.ベクター |
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| Research Abstract |
相同組換え効率の上昇を図るため、改良型ヘルパー依存型アデノ.AAV.BTKベクターを作製した。具体的な改良点として、恒常的な発現制御が期待できるEF1プロモーター下に、GFP遺伝子、ピューロマイシン耐性遺伝子、非特異的な組換えを除くため、単純ヘルペスウイルス1型－チミジンキナーゼ（HSV-TK）遺伝子を搭載した。また、相同組換え修復後の遺伝子配列の検出を考慮して、ベクターに搭載する遺伝子領域および配列を変更した。
BTK遺伝子をターゲットとした人工ヌクレアーゼを作製し、特異的なDNA切断を誘導できることを確認した。この人工ヌクレアーゼとヘルパー依存型アデノ.AAV.BTKベクターを併用することで、相同組換え効率の上昇が認められるかを検討中である。
臍帯血由来CD34陽性造血幹細胞と同様に、In vitroでフィーダー細胞を用いずに骨髄CD34陽性造血幹細胞よりB細胞系へ分化誘導研究を行い、分化能を評価するための培養系を検討中である。
iPS細胞を用いた研究では、正常ヒトiPS細胞株を用いて、iPS細胞よりB細胞へ誘導する培養系の確立を目指し、iPS細胞よりCD34陽性細胞を誘導し、その後CD34陽性造血幹細胞よりB細胞へ分化誘導する系を応用して現在検討中である。
ヒト化XLAモデルマウスでは、BTK-cDNA搭載レンチウイルスベクターの改変を行い、遺伝子導入およびB細胞分化の検討を続けている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
相同組換え効率の上昇を図るため、改良型ヘルパー依存型アデノ.AAV.BTKベクターを作製した。
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| Strategy for Future Research Activity |
更なる相同組換え効率の上昇を目的として作製した改良型ヘルパー依存型アデノ.AAV.BTKベクターで、血球系細胞株および臍帯血由来CD34陽性造血幹細胞で相同組換えによるBTK遺伝子修復を行い、その効率を算定し評価する。また、ウイルスベクターに人工ヌクレアーゼを併用することで、遺伝子修復効率の向上を試みる。
引き続き、iPS細胞から造血幹細胞を経て、B細胞へ分化誘導する培養系を確立する。確立後、XLA患者由来iPS細胞へターゲティングによる遺伝子修復を行い、B細胞分化能を検討する。
ヒト化XLAモデルマウスでは、レンチウイルスベクターを用いてBTK遺伝子導入を行い、in vivoでのB細胞分化、抗体産生能の検討を行う。
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[Journal Article] B cell function after unrelated umbilical cord blood transplantation using minimal-intensity conditioning regimen in patients with X-SCID.2013
Author(s)
Kumaki S, Sasahara Y, Kamachi Y, Muramatsu H, Morio T, Goi K, Sugita K, Urabe T, Takada H, Kojima S, Tsuchiya S, Hara T
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Journal Title
Int J Hematol
Volume: 98
Pages: 355-60
DOI
Peer Reviewed
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