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2011 Fiscal Year Annual Research Report

コラーゲン細線維の積層と細胞成長因子の固相化による人工組織の実用化に関する研究

Research Project

Project/Area Number 22300167
Research InstitutionKitasato University

Principal Investigator

安達 栄治郎  北里大学, 医療系研究, 教授 (30110430)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 赤池 敏宏  東京工業大学, 大学院・フロンティア研究機構, 教授 (30101207)
田川 陽一  東京工業大学, 大学院・生命理工学研究科, 准教授 (70262079)
西山 敏夫  東京農工大学, 農学部, 教授 (60372455)
松下 治  北里大学, 医学部, 教授 (00209537)
Keywordsコラーゲン / コラーゲン細線維 / 人工血管 / PK15細胞 / PLAシート / バイオリアクター / CBD-cytokine / PEAC細胞
Research Abstract

平成23年度は下記の様な研究成果を上げることができた。
(1)大型平板型リアクターを試作し、10cm^2の円形組織(従来4.5cm^2)を開発中である。
(2)血管作成用円筒形リアクター内壁に重層化組織を再構成できた。
(3)毛細血管網を持った平板型高密度コラーゲン組織開発を継続している。
本年度は細菌由来コラーゲン結合性ペプチドと細胞成長因子の融合タンパク質(CBD-cytokine)を用いた人工組織の作成を試みた。1μg/mlCBD-hEGF(コラーゲン結合性ヒト型表皮増殖因子)に30分浸漬したコラーゲンゲルに免疫染色を行ってCBD-hEGFの局在を検討したところ、ゲルの上層に局在していた。しかしながら同ゲルを用いて人工皮膚の再構成を試みたところ、CB-hEGFを処理した群ではEGFを処理しない群と比べて有意に表皮層の重層化が抑制されることが示された。これらの結果より、収縮ゲル表面に高濃度に局在するEGFが皮膚モデルの表皮細胞増殖を阻害し、重層化を抑制した可能性が考えられる。現在、1,10,100,1000ng/m1で処理して濃度依存性を検討中である。
2種類の血管内皮細胞(PK15細胞、PEAC細胞)を佐野博士(東京大学)より分与していただき、リアクターを用いて血管(内径4mmと16mm)と毛細血管網を持った高密度コラーゲン組織開発を行った。人工ポリマー製人工血管(内径4mmと16mm)内壁に高密度コラーゲン組織を作成し、その内面に基底膜成分であるマトリゲルとともに培養内皮細胞を播種したところ、内皮細胞が血管内面に生着することが明らかになった。
一方、内皮細胞を高密度コラーゲンゲル内に播種するだけでは毛細血管網の再構成につながらなかった。線維芽細胞などの間質細胞との共培養系やCBD-VEGF(血管内皮増殖因子)による内皮細胞増殖刺激による実験を継続し、完成を目指している。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

本研究計画の目的である重層化人工組織として3次元人工肝臓の作製に成功した。免疫不全マウスに移植して機能を発現することから主要目的は達成している。さらに部分的とはいえ円筒形の人工血管再構成に成功していることから3次元の形態を維持した人工組織を開発できた。これらのことから本研究計画はおおむね順調に目標を達成していると考えられる。

Strategy for Future Research Activity

細菌由来コラーゲン結合性ペプチドと細胞成長因子の融合タンパク質(CBD-cytokine)が重層化3次元組織の再構成に有効であると期待していた。しかしながら現在までその有効性は確認できず、局所に細胞活性が集積することから有効局所濃度は予想より低いと考えられる。平成24年度はその有効濃度の検索、高密度コラーゲン組織に固相化して有効な細胞成長因子(例えばEGFは適さないがVEGFは有効であるなど)の検索、フィプロネクチンやvon Willebrand因子の部分ペプチドを用いたコラーゲン結合性ペプチドと細胞成長因子に切り替えることなども検討して行く予定である。
本研究計画の目指す人工重層化組織に関する特許についてコラージェンファーマ社と独占使用契約を締結した。
今後は実用化を目指した事業化を視野に入れて人工組織作成法の標準化を進めていく予定である。

  • Research Products

    (15 results)

All 2012 2011 Other

All Journal Article (5 results) (of which Peer Reviewed: 5 results) Presentation (8 results) Book (1 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] The transformation suppressor gene Reck is required for postaxial patterning in mouse forelimbs2012

    • Author(s)
      Yamamoto Mako, 他14名
    • Journal Title

      Biology Open

      Volume: (in press)

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] IL-1beta stimulates activin betaA mRNA expression in human skin fibroblasts through the MAPK pathways, the nuclear factor-kappaB pathway, and prostaglandin E22012

    • Author(s)
      Arai Koji, 他6名
    • Journal Title

      Endocrinology

      Volume: 152 Pages: 3779-3790

    • DOI

      10.1210/en.2011-0255

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Pale neurites, the earliest α-synuclein aggregates with centripetal extension from axon collaterals2012

    • Author(s)
      Kanazawa Toshiro, 他5名
    • Journal Title

      Brain Pathology

      Volume: 22 Pages: 67-78

    • DOI

      10.1111/j.1750-3639.2011.00509.x

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Key role of heparan-sulfate chains in assembly of anchoring complex at the dermal-epidermal junction2011

    • Author(s)
      Iriyama, Shunsuke, 他3名
    • Journal Title

      Experimental Dermatology

      Volume: 20 Pages: 943-958

    • DOI

      10.1111/j.1600-0625.2011.01329.x

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Monthly administration of a novel PTH-collagen binding domain fusion protein is anabolic in mice2011

    • Author(s)
      Ponnapakkam Tulasi, 他9名
    • Journal Title

      Calcif Tissue Int

      Volume: 88 Pages: 511-520

    • DOI

      10.1007/s00223-011-9485-1

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Bacterial collagen-binding domains-Molecular basis and clinical applications2012

    • Author(s)
      松下治, 他3名
    • Organizer
      第85回日本細菌学会総会
    • Place of Presentation
      長崎新聞文化ホール(長崎県)
    • Year and Date
      2012-03-27
  • [Presentation] ヒトES/iPS細胞を用いたin vitroヒト肝組織モデルの構築2011

    • Author(s)
      安成晧, 他3名
    • Organizer
      第34回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(神奈川県)
    • Year and Date
      20111213-20111216
  • [Presentation] Medial application of clostridial toxins ; 2) Collagenases2011

    • Author(s)
      松下治, 他10名
    • Organizer
      第84回日本細菌学会総会
    • Place of Presentation
      札幌コンベンションセンター(北海道)
    • Year and Date
      20110906-20110910
  • [Presentation] Characterization of Artificial Liver Tissues Composed of Primary Hepatocytes Embedded in Dense Collagen Gels2011

    • Author(s)
      Tamai Miho, 他3名
    • Organizer
      Gordon Research Conference on Collagen
    • Place of Presentation
      Colby-Sawyer College (New Hampshire)
    • Year and Date
      20110717-20110722
  • [Presentation] 三次元培養ヒト皮膚モデル:皮膚の構造と機能の研究ツールとして2011

    • Author(s)
      西山敏夫
    • Organizer
      皮膚基礎研究クラスターフォーラム
    • Place of Presentation
      タワーホール船堀(東京都)
    • Year and Date
      2011-07-14
  • [Presentation] マウス皮膚におけるコラーゲン発現の性差2011

    • Author(s)
      原卓也, 他4名
    • Organizer
      第43回日本結合組織学会学術大会第58回マトリックス研究会大会合同学術集会
    • Place of Presentation
      ビーコンプラザ(大分県)
    • Year and Date
      2011-06-10
  • [Presentation] 皮膚線維芽細胞におけるアクチビンおよびフォリスタテンmRNA発現調節機構2011

    • Author(s)
      藤岡温子, 他6名
    • Organizer
      第43回日本結合組織学会学術大会第58回マトリックス研究会大会合同学術集会
    • Place of Presentation
      ビーコンプラザ(大分県)
    • Year and Date
      2011-06-10
  • [Presentation] Heparanaseは皮膚モデルにおける表皮の増殖・分化に関与している2011

    • Author(s)
      福島秀和, 他4名
    • Organizer
      第43回日本結合組織学会学術大会第58回マトリックス研究会大会合同学術集会
    • Place of Presentation
      ビーコンプラザ(大分県)
    • Year and Date
      2011-06-10
  • [Book] 第4章ものつくりに役立つ細胞外マトリックス(コラーゲン、エラスチン、ラミニン、GAG)2011

    • Author(s)
      森奈津希、安達栄治郎
    • Total Pages
      16
    • Publisher
      CMC出版
  • [Remarks]

    • URL

      http://morpholab.ahs.kitasato-u.ac.jp/adachilabHP/indexaj.html

URL: 

Published: 2013-06-26  

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