2010 Fiscal Year Annual Research Report
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22590231
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| Research Institution | Osaka Institute of Technology |
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Principal Investigator |
松村 潔 大阪工業大学, 情報科学部, 教授 (10157349)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小林 茂夫 京都大学, 情報学研究科, 教授 (40124797)
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| Keywords | 発熱 / プロスタグランジン / シクロオキシゲナーゼ / マウス / 細菌内毒素 |
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| Research Abstract |
本年度は3年計画の初年度にあたる。赤血球および血小板に由来する内因性発熱物質を探索するためのマウス実験系の確立をめざし、ほぼ目的を達成した。実験系はラットではすでに確立していたがマウスでは未確立であった。発熱を引き起こすことが確実な細菌内毒素(LPS)を投与して以下の実験を実施した。
(1) マウス脳室投与:マウスをフォーレンで麻酔しLPS(50ng/2μl)を頭皮上から側脳室に投与した。
(2) 体温測定:腹腔に体温テレメータを留置し体温を測定した。LPS投与により体温上昇が観察された。
(3) 脳組織中のプロスタグランジンE2(PGE2)の測定:LPS投与後3時間でマウスをペントバルビタール麻酔し、左心室から10μMのインドメタシンを含む生理食塩水を潅流した。脳の凍結切片をインドメタシン含有エタノール中で粉砕し、遠心後エタノール相を採取した。エタノールを気化させ残渣中のPGE2をEIA法で測定した。対照群とLPS群で明確な測定値の差を検出することができた。
(4) 脳組織におけるcyclooxygenase (COX)の免疫組織化学による検出:凍結脳切片を10%ホルマリンで固定後、抗COX-2抗体、抗COX-1抗体で免疫染色を行った。LPS投与群では内皮細胞にCOX-2様免疫活性が検出された。またCOX-1はミクログリアで検出された。
(5) 脳組織におけるCOXのwestern blotによる検出:未だ結果が不安定である。実験条件の検討が必要。
(6) 脳組織におけるmRNAのリアルタイムPCRによる定量:凍結脳切片よりmRNAを抽出し、逆転写し、リアルタイムPCR-TaqMan probe法でCOX-2mRNA, β-actin mRNAの定量を行った。LPS投与によりCOX-2mRNAが増加することを確認した。
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