2011 Fiscal Year Annual Research Report
オステオポンチン蛋白多型部位を標的とする糸球体腎炎新規治療法の開発
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22590361
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| Research Institution | Ehime University |
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Principal Investigator |
宮崎 龍彦 愛媛大学, 大学院・医学系研究科, 准教授 (80239384)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
倉田 美恵 愛媛大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (80423440)
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| Keywords | オステオポンチン / 立体構造 / 競合的阻害 / 膠原病治療モデル |
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| Research Abstract |
申請者らは糸球体腎炎感受性因子であるOpnの多型により修飾されるインテグリン結合サイトを阻害する新規アナログを作成し、Opnの多型部位の阻害による新たな膠原病治療戦略の確立を目的に研究を行うことを企図し、以下の結果を得た。
1,蛍光ビーズを用いた蛋白相互作用解析によるOpn結合阻害蛋白候補のスクリーニングFluorometric Microvolume Assayの原理によるAlpha ScreenによりOph機能阻害蛋白をスクリーニングし、この部位に結合アフィニティーをもつ蛋白をこの段階で80クローンに絞り込んだ。
次に、GST-capture ELISAを用いて、詳細に候補蛋白とOpnの結合アフィニティーを濃度勾配をつけて解析し、疾患感受性アレルのOpnに高アフィニティーを示し、疾患抵抗性アレルのOpnではアフィニティーの落ちる蛋白を5クローン選択した。
2.Oph結合阻害蛋白のin vitroにおける二次スクリーニング
上記1.でスクリーニングされた結合アフィニティーを持つ蛋白について、in vitroにおけるOpn機能阻害が行われるか、bioassayを用いて検索した。
2-1)免疫担当細胞とのOpn結合アフィニティー阻害能の解析
2-2)阻害蛋白による免疫機能modulationの解析をそれぞれ行い、5クローンから3クローンをOPn結合阻害アナログの候補として見出した。
現在、これらのクローンにつき、マクロファージ活性化、マクロファージ遊走、脾細胞を用いた抗体産生誘導能・T細胞活陸化能(Th1,Thi17)の阻害などについて詳細に解析を行っている。
今後、これらのアナログを膠原病モデルマウスMRL/lprやMXH/lprに投与する予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
蛋白アフィニティーの解析実験に乱、予想以上に時間がかかり、in vivoにおける投与実験への移行がやや遅れているものの、ほぼ予定通りに解析結果を得て実験のステップが進展している。このまま研究を続ければ、申請期間内に期待した結果が得られる可能性が高い。
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| Strategy for Future Research Activity |
おおむね順調に進展しているが、上記のごとく、予定よりもわずかに進展が遅れている。
In vivoに於ける投与実験、in vitvoに於ける阻害機能の解析実験をやや簡潔化し、期間内に実験が終了するよう調整する。その場合、次回プロジェクトにおいて、特にアナログ投与のDDSに関する研究を再度詳細に検討する必要が出てくる。
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[Presentation] A BAC transgene with a polymorphic Cd72 inhibits the development of glomerulonephritis and vasculitis in murine lupus2012
Author(s)
Oishi, H., Tsubaki, T., Miyazaki, T., Ono, M., Nose, M., Takahashi, S
Organizer
The Asian Pacific Meeting of Vasculitis and ANCA Workshop 2012
Place of Presentation
東京
Year and Date
2012-03-28
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[Presentation] コムギ胚芽無細胞タンパク質合成系を利用した病変局所で産生される抗体の標的抗原検索法の開発関節リウマチをモデルとして2011
Author(s)
水谷泰嘉, 松岡和弘, 竹田浩之, 早川和恵, 宮崎龍彦, 塩竃和也, 稲田健一, 澤崎達也, 遠藤弥重太, 山田治基, 堤寛
Organizer
第52回日本組織細胞化学会総会学術集会
Place of Presentation
金澤
Year and Date
2011-09-24
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