2012 Fiscal Year Annual Research Report
低分子バイオマーカーの高感度モニタリングを支援する新世代抗体ライブラリーの創製
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22590542
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| Research Institution | Kobe Pharmaceutical University |
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Principal Investigator |
小林 典裕 神戸薬科大学, 薬学部, 教授 (90205477)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大山 浩之 神戸薬科大学, 薬学部, 助教 (80572966)
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| Project Period (FY) |
2010-04-01 – 2013-03-31
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| Keywords | バイオマーカー / モニタリング / 抗体 / 抗体ライブラリー / 抗体工学 |
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| Research Abstract |
抗体可変部であるVH, VLドメインは, 抗原との結合に関与する相補性決定部 (CDR) と, CDRを支える枠組み領域 (FR) から成る. FRの多様性はCDRに比べて小さく, 同じ可変部サブグループ内では類似の配列をとる. これまでに, 抗ハプテン抗体アミノ酸配列のデータベースを作成して精査し, VHのサブグループとして IIAとIIIDが, VLのサブグループとしてIIとVが高頻度に現れることを見出した. その一方で, 変異一本鎖Fvフラグメント (scFv) ライブラリーの多様性を高めるためにファージ提示用ベクターを改良した. そこで，以上の結果をもとに，当研究室で既にクローニングした抗コルチゾール (CS) 抗体scFv [サブグループVH = IIB (IIAと酷似)，VL = II] をマスターフレームとして，ライブラリーを作製した．しかし，期待に反してオリジナル抗原であるCSにさえ，実用的な結合能を示す変異scFvが単離できず，結合部位の構築にVHとVLの2つのドメインを必要とするscFvの複雑さを克服するには，変異導入部位の選択について莫大な試行錯誤が必要と思われた．そこで，よりシンプルなマスターフレームを模索し，ビオチン結合タンパク質であるストレプトアビジン単量体 (stav;単一のドメインから成り分子量はscFvの約1/2) に着目した．stav は8つのβシート (β1～β8) を持ち，連続するβシートはランダムコイル (ループ) で連結されている．そこで，β1～β2間，β3～β4間，β4～β5間のいずれかのループ内に，連続する3アミノ酸に12通りの多様性を生じる変異 [縮重コドン (NDC) による] を導入したライブラリーを構築したところ，エストラジオールとコルチゾールに対する結合能を獲得した変異クローンを単離することができた．
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| Current Status of Research Progress |
Reason
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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