2012 Fiscal Year Annual Research Report
翻訳リボゾーム親和精製法による弓状核におけるインスリンシグナルの標的遺伝子の同定
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22590995
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
中江 淳 慶應義塾大学, 医学部, その他 (00344573)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
川野 義長 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (80571463)
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| Project Period (FY) |
2010-04-01 – 2013-03-31
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| Keywords | AGRPニューロン / TRAP法 / 遺伝子発現解析 |
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| Research Abstract |
本研究では、視床下部弓状核のAGRPニューロンにおける3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1 (PDK1)-Foxo1経路の標的遺伝子を同定することを目的としている。そのためのニューロン特異的遺伝子発現解析の方法として、Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP)法を利用することを選択した 。すなわち、EGFPとlarge-subunit ribosomal protein L10aのN末端との融合蛋白をAGRPニューロン特 異的に発現させるトランスジェニックマウスを作製し、抗EGFP抗体による免疫沈降を利用し、AGRPニ ューロン特異的な遺伝子発現解析を網羅的に行うことを計画した。HEK293培養細胞において、 EGFP-L10aを一過性発現させ、抗EGFP抗体にて免疫沈降することにより、RNAを回収しうることを確 認した。現在、EGFP-L10aを組織特異的に発現させるtransgeneの構築を終了した。さらにこのtransgene が、Cre recombinaseにより、発現が誘導されることを細胞レベルで確認した。並行して、組織特異的 EGFP-L10a発現トランスジェニックマウスを樹立するため、transgeneの injectionを行い、2ラインの陽性マウスを得ることができた。今後、このマウスとニューロン特異的Cre recombinase発現トランスジェニックマウスを掛け合わせることにより、実際にTRAP法を試み、ニューロン特異的の遺伝子発現解析を行う予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Reason
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Journal Article] Novel repressor regulates insulin sensitivity through interaction with Foxo12012
Author(s)
Nakae J, Cao Y, Hakuno F, Takemori H, Kawano Y, Sekioka R, Abe T, Kiyonari H, Tanaka T, Sakai J, Takahashi S, Itoh H
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Journal Title
EMBO J
Volume: 31
Pages: 2275-95
Peer Reviewed
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[Journal Article] Overexpression of FoxO1 in the Hypothalamus and Pancreas Causes Obesity and Glucose Intolerance2012
Author(s)
Kim HJ, Kobayashi M, Sasaki T, Kikuchi O, Amano K, Kitazumi T, Lee YS, Yokota-Hashimoto H, Susanti VY, Kitamura YI, Nakae J, Kitamura T
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Journal Title
Endocrinology
Volume: 153
Pages: 659-71
Peer Reviewed
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[Journal Article] Loss of PDK1-Foxo1 signaling in myeloid Cells predisposes to adipose tissue inflammation and insulin resistance2012
Author(s)
Kawano Y, Nakae J, Watanabe N, Fujisaka S, Iskandar K, Sekioka R, Hayashi Y, Tobe K, Kasuga M, Noda T, Yoshimura A, Onodera M, Itoh H
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Journal Title
Diabetes
Volume: 61
Pages: 1935-1948
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Involvement of SIK3 in Glucose and Lipid Homeostasis in Mice2012
Author(s)
Uebi T, Itoh Y, Hatano O, Kumagai A, Sanosaka M, Sasaki T, Sasagawa S, Doi J, Tatsumi K, Mitamura K, Morii E, Aozasa K, Kawamura T, Okumura M, Nakae J, et al.
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Journal Title
PLoS One
Volume: 7
Pages: e37803
DOI
Peer Reviewed
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