2010 Fiscal Year Annual Research Report
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22592029
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
中村 公則 北海道大学, 大学院・先端生命科学研究院, 特任助教 (80381276)
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| Keywords | 自然免疫 / 細胞・組織 |
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| Research Abstract |
平成22年度は「口腔細菌の腸管への影響」を検討するために,マウス上皮細胞の初代培養法を確立を目ざし、以下の実験を行った。(1)CD-1マウス胎生17日から小腸組織を採取し、長軸方向に開き、HBSSに浸した状態で約1mmの長さに切り刻み、洗浄後、培養液(DMEM-10%FBS)で37℃、5%CO2で培養した。2日ごとに培地を交換した。培養した組織を位相差顕微鏡で観察した。培養後3日目から小腸組織の周辺に紡錘状の形態をした細胞の増殖が観察された。5日後には小腸組織の裏側に紡錘状細胞に囲まれて、多角形の細胞が増殖してきた。(2)マウス小腸組織から得られた培養細胞の免疫染色:上皮細胞のマーカーとしてサイトケラチン抗体(Wide spectrum Cytokeratin)とEカドヘリン抗体、間葉系細胞のマーカーとしてα-SMA抗体、ビメンチン抗体を用いて免疫染色を行った。結果、紡錘状の細胞はα-SMAが陽性、あるいはビメンチンが陽性だったことから間葉系細胞だと考えられた。また、多角形の細胞は細胞質がサイトケラチン陽性で細胞膜はEカドヘリン陽性だったことから上皮細胞だと考えられた。(3)本研究では小腸上皮細胞株の樹立を目的としているため、間葉系細胞が混在している細胞集団から上皮細胞のみをセルソーターを使用した分離を試みた。培養開始14日目に増殖した細胞を回収し、Eカドヘリン抗体で染色した。その後、セルソーターでEカドヘリン陽性分画をソートし、培養を行った。結果、ソート後、培養皿に接着した細胞は少なく細胞増殖が見られなかった。今後、ソーティング時の細胞数の検討、ソーティング後の培養液の検討等を行い、マウス小腸上皮細胞株の樹立を引き続き試みる。
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