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2012 Fiscal Year Annual Research Report

口腔常在菌が腸管自然免疫に及ぼす影響の検討

Research Project

Project/Area Number 22592029
Research InstitutionHokkaido University

Principal Investigator

中村 公則  北海道大学, 先端生命科学研究科(研究院), 助教 (80381276)

Project Period (FY) 2010-04-01 – 2013-03-31
Keywords自然免疫
Research Abstract

口腔常在菌や歯周病菌などの病原菌の腸管上皮への影響を解析するために、マウス小腸上皮細胞の培養法の確立、特にαディフェンシンを分泌するパネト細胞の株化を目標とした。マウス上皮細胞の初代培養:CD1マウス胎生17日から小腸組織を採取後、培地 (DMEM-10%FBS)で37℃、5%CO2で培養して得られた初代細胞群は線維芽細胞などの間葉系細胞と共に上皮細胞形態を示す細胞も多く含まれた。しかし、細胞内に顆粒を持つパネト細胞の形態を示す上皮細胞は観察できなかった。そこで、次にオルガノイド培養を試みた。小腸オルガノイド培養:マウス CD1から小腸組織を採取し、縦切開、絨毛除去、EDTA処理後、陰窩部位を組織より分離した。分離した陰窩をマトリゲルに包埋し、EGF、Noggin、R-spondin1を含む無血清培地で37℃、5%CO2で培養した。培養1日目には陰窩は円状を示し、培養4日目には管腔状で陰窩領域と絨毛領域をもつ小腸オルガノイドに成長した。その後、成長オルガノイドは7日毎に継代を行い2ヶ月以上の長期培養が可能だった。パネトの細胞同定:オルガノイドの陰窩領域先端部には顆粒を細胞内に持つ細胞が多く見られた。この細胞内に顆粒を保持する細胞がパネト細胞かを知るために、パネト細胞顆粒に特異的に存在するクリプチンを免疫染色にて検出を試みた。結果、顆粒内は染色されオルガノイド陰窩部にパネト細胞が存在していることが示された。以上、本研究により得られたオルガノイド・パネト細胞を用いることで様々な菌種との相互間関係を解析できる可能性が示された。

Current Status of Research Progress
Reason

24年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

24年度が最終年度であるため、記入しない。

  • Research Products

    (3 results)

All 2013 2012 Other

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results) Presentation (1 results)

  • [Journal Article] Intracellular superoxide dismutase activity defines invasiveness of the murine T-lymphoma cell line L5187Y-ML25 in vitro and in vivo.2013

    • Author(s)
      Tanaka M
    • Journal Title

      Leuk Res

      Volume: 37 Pages: 89-92

    • DOI

      DOI: 10.1016/j.leukres.2012.07.021

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Graft-versus-host disease disrupts intestinal microbial ecology by inhibiting Paneth cell production of α-defensins.2012

    • Author(s)
      Eriguchi Y
    • Journal Title

      Blood

      Volume: 120 Pages: 223-231

    • DOI

      10.1182/blood-2011-12-401166

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Deficiency of secreted cryptdin-4 detected in a mouse model of Crohn’s disease using a new sandwich ELISA.

    • Author(s)
      Nakamura K
    • Organizer
      Experimental Biology 2012
    • Place of Presentation
      San Diego Convention Center (USA)

URL: 

Published: 2014-07-24  

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