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2010 Fiscal Year Annual Research Report

DNAメチル化と血管内皮細胞特異的遺伝子発現

Research Project

Project/Area Number 22790066
Research InstitutionOsaka University

Principal Investigator

岡田 欣晃  大阪大学, 薬学研究科, 助教 (50444500)

Keywords血管内皮細胞 / Robo4 / エビジェネティクス / DNAメチル化 / 遺伝子発現制御
Research Abstract

我々は、Robo4遺伝子が血管内皮細胞に特異的に発現するメカニズムを明らかにするために、エピジェネティックな転写制御に着目し研究を行っている。今回、Robo4プロモーターのDNAメチル化が血管内皮細胞特異的な遺伝子発現に寄与するかについて検討を行った。まず、血管内皮細胞と非血管内皮細胞をDNAメチル化酵素阻害剤(5-aza-2'-deoxycitidine)で処理したところ、Robo4遺伝子の発現は血管内皮細胞ではほとんど変化しなかったが、非血管内皮細胞では顕著に発現が上昇した。この結果から、DNAメチル化がRobo4遺伝子の発現制御に関与し、特に非血管内皮細胞における遺伝子発現抑制に関与することが明らかになった。次に、この発現抑制がプロモーターのDNAメチル化によりもたらされているのかを解析するため、メチル化サイトに変異を導入した変異プロモーターを作製した。次に、この変異プロモーターにLacZ遺伝子を連結した配列1コピーをマウスES細胞のHprt遺伝子上流に相同組換えにより挿入した。得られた変異プロモーターを持つES細胞をin vitroで血管内皮細胞へと分化させたところ、野生型プロモーターを持つES細胞と同等のLacZ遺伝子の発現が確認され、変異プロモーターが血管内皮細胞において野生型と同等の活性を持つことが明らかになった。一方、同じES細胞を血管内皮細胞と非血管内皮細胞の両者を含む胚様体へと分化させたところ、野生型プロモーターをもつ胚様体に比べ、変異プロモーターを持つ胚様体ではLacZの発現が1.5倍以上増加することが明らかになった。また、両胚様体には同程度の血管内皮細胞が含まれていたことから、変異プロモーターが非血管内皮細胞において活性化されたことが示唆された。以上の結果から、プロモーターのDNAメチル化が血管内皮細胞特異的遺伝子発現に寄与する可能性が示された。

  • Research Products

    (6 results)

All 2011 2010 Other

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (4 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Vascular bed specific regulation of the von Willebrand factor promoter in the heart and skeletal muscle2011

    • Author(s)
      Ju Liu, Yoshiaki Okada
    • Journal Title

      Blood

      Volume: 117 Pages: 342-361

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 血管内皮細胞特異的に発現するRobo4遺伝子の発現は血管平滑筋細胞の共存により抑制される2011

    • Author(s)
      鈴木綾乃, 成瀬啓樹, 舟橋伸昭, 西山侑児, 岡田欣晃, 土井健史
    • Organizer
      日本薬学会第131年会
    • Place of Presentation
      ツインメッセ静岡
    • Year and Date
      2011-03-30
  • [Presentation] Robo4遺伝子の血管内皮細胞特異的な発現を担うエピジェネティックな遺伝子発現制御メカニズム2011

    • Author(s)
      西山侑児, 舟橋伸昭, 成瀬啓樹, 鈴木綾乃, 岡田欣晃, 土井健史
    • Organizer
      日本薬学会第131年会
    • Place of Presentation
      ツインメッセ静岡
    • Year and Date
      2011-03-30
  • [Presentation] 血管新生関連因子Robo4の発現制御メカニズムの解析2010

    • Author(s)
      成瀬啓樹
    • Organizer
      BMB2010
    • Place of Presentation
      神戸ポートアイランド
    • Year and Date
      2010-12-09
  • [Presentation] Robo4遺伝子が血管内皮細胞特異的に発現するメカニズムとは?2010

    • Author(s)
      岡田欣晃
    • Organizer
      第11回Pharmaco-Hematologyシンポジウム
    • Place of Presentation
      日本薬学会長井記念ホール
    • Year and Date
      2010-06-19
  • [Remarks]

    • URL

      http://www.phs.osaka-u.ac.jp/homepage/b018/

URL: 

Published: 2012-07-19  

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