2023 Fiscal Year Research-status Report
ゼブラフィッシュのプロテオーム解析による一次線毛動態制御因子の探索と機能解析
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22K06882
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| Research Institution | Mie University |
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Principal Investigator |
白水 崇 三重大学, 医学系研究科, 助教 (00582678)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
稲垣 昌樹 三重大学, 医学系研究科, 客員教授 (30183007)
西村 有平 三重大学, 医学系研究科, 教授 (30303720)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | 一次線毛 / ゼブラフィッシュ / プロテオミクス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
【研究目的】
細胞膜上に存在する小さな不動性の突起である一次線毛(Primary cilia)は細胞内外のシグナル伝達に働き、その構造形成および機能に関する遺伝子の異常が線毛病と言われる一連の疾患を引き起こすことが知られている。また一次線毛を介したシグナル伝達が、細胞の増殖や停止に関わることが示唆されたことから、一次線毛の動態制御メカニズムの解明が、新たながん治療の標的に繋がることが期待されている。我々はこれまでに、一次線毛形成に関わる遺伝子としてトリコプレインを同定し、ユビキチン・プロテアソーム系を介した制御により、一次線毛の形成抑制に働くことを明らかにしてきた。しかしながら、ユビキチン・プロテアソームを介した一次線毛形成のメカニズムには未解明な点が多く、その全貌は明らかにされていない。そこで本研究では、プロテオーム解析によりこの経路の
制御に関わるタンパク質を網羅的に同定し、ゼブラフィッシュを用いたin-vivo解析によりその機能を評価することにより、一次線毛の形成を制御する機構を解明することを目的とした。
【令和５年度の成果】
TCHPノックアウトゼブラフィッシュの組織を用いたプロテオーム解析の結果から、新規の一次線毛シグナル関連遺伝子の絞り込みを行った。具体的には、発現変動遺伝子において、過去に報告された機能から組織再生との関連が示唆される分子を選び、qPCRによる発現変動の検証実験を行った。その結果得られた候補分子を、新規一次線毛シグナル関連候補分子とした。さらに、その候補分子の特異的抗体を作成し、in-vivoでの検証実験の系を立ち上げた。今後は、その候補分子の一次線毛との関連について詳細な検討を進める予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度はプロテオーム解析の結果から、一次線毛シグナルに関わる新規分子の候補を絞り込むことができた。過去の報告からは一次線毛との関わりは未知であるが、qPCRによる発現変動の検証により、プロテオーム解析の結果と同じくTCHPノックアウト個体での発現変動を確認することができた。また、ターゲット分子の特異的抗体が作成できたことや、新たなin-vivo実験系を立ち上げることが出来たので、今後の詳細な分子メカニズムの解明を進めることが可能だと思われる。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後の研究の推進方策として、まずは標的遺伝子のin-vivoでの機能解析を行う予定である。具体的には、標的遺伝子の発現プロファイルを特異抗体やIn-situ hybridizationを用いて調べる。また、組織再生における標的分子の役割と一次線毛との関連について評価を行う予定である。
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| Causes of Carryover |
(理由)
年度内に購入、使用予定であった物品の納入が間に合わなかったため、年度内での支払いを行うことができなかった。
(使用計画)
ゼブラフィッシュを用いた解析に使用する物品の購入に充てる。
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