2023 Fiscal Year Research-status Report
Novel synthetic lethal therapy for biliary tract cancer via epigenetic DNA damage repair inhibition
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22K16034
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
平田 幸司 北海道大学, 医学研究院, 客員研究員 (70875442)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | 合成致死 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
胆道癌細胞株を用いて、引き続き、DNAメチル化阻害を用いたエピジェネティックな相同組み換え阻害による、新規治療法の探索を行っている。昨年度に引き続き、PAPR阻害剤に耐性を持つ胆道癌細胞株を用いて、DNAメチル化阻害剤を用い、細胞周期およびアポトーシスに与える影響を検討した。DNAメチル化阻害剤により、有意にG2/M期が増加した。それに伴い、PARP阻害剤単剤と比較して、DNAメチル化阻害剤を加えることにより、アポトーシスが有意に増加することをフローサイトメトリー確認した。
DNAメチル化酵素として、DNMT１、DNMT3a、DNMT3bの三種類があり、それぞれsiRNAを用いてノックダウンし、PAPR阻害剤に対する感受性を増加させるかどうかを検討した。まず、siRNAによるノックダウンの程度をqPCR法にて確認を行ったところ、それぞれ２種類のsiRNAで適切にノックダウンされていることを確認した。ノックダウンした細胞株において、ノックダウンしていない細胞と比較し、DNAメチル化阻害剤と同様に、相同組換えの頻度が減弱することを確認した。また、細胞周期の解析を行い、同様に、G2/M期が増加することを確認した。それにともない、DNAメチル化酵素をノックダウンすると、ノックダウンしていない細胞に比べて、有意にPARP阻害剤に対する感受性が増加することを確認した。さらに、ノックダウンした細胞にPAPR阻害剤を作用させると、有意にアポトーシスの割合が増加することをフローサイトメトリーで確認した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
RNAシーケンシングの解析が遅れている
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| Strategy for Future Research Activity |
RNAシーケンシングの解析を行い、エピジェネティックな相同組換え抑制に関わる因子を明らかにしていく。
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| Causes of Carryover |
RNAシーケンスの条件設定に時間を要し、当初予定していたRNAシーケンシング、メチレーション解析を次年度のおこなうことになったため。
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