2022 Fiscal Year Research-status Report
がん組織環境中の細胞外小胞を介した相互作用の時空間的解析
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22K20805
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| Research Institution | Waseda University |
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Principal Investigator |
西田 奈央 早稲田大学, 高等研究所, 講師(任期付) (80737114)
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| Project Period (FY) |
2022-08-31 – 2024-03-31
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| Keywords | 細胞外小胞 / エクソソーム / がん微小環境 / 3D組織モデル / 乳がん |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究はがん組織という構造の中で、がん細胞から正常細胞への細胞外小胞の受け渡しを定量的・時空間的に理解することを目標としている。本年度は、細胞外小胞を詳細に観察するため、高感度な細胞外小胞ラベルを最適化した。細胞外小胞の表面タンパク質をCD9, CD63, CD81に対して蛍光ラベルを融合させた融合タンパク質を設計し、乳がん細胞に導入して安定発現株を作製した。次に、がん組織を実験室で培養維持できる組織スライスモデルを最適化し、組織スライス上に存在する細胞によってがん細胞外小胞が取りこまれる様を観察できることを実証した。さらに、組織スライスを応用して乳がんの臓器転移モデルを作製し、がん細胞由来の細胞外小胞が周囲のがん以外の細胞に取り込まれる様子を観察することに成功した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
計画通り、細胞外小胞の高感度な蛍光標識方法を開発、最適化し、また組織スライス上での細胞外小胞の観察に成功したため。一方で、細胞外小胞を取り込んだ細胞の検出に関してはまだ課題が残るので、次年度も継続して最適化する。
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| Strategy for Future Research Activity |
がん由来の細胞外小胞を取り込んだ細胞を特定するための手技を最適化する。まずは、細胞外小胞由来の蛍光を指標に、フローサイトメトリーで細胞の種類を特定する。次に、空間的な分布を観察するために、組織内の細胞を生きたままラベルする手法、顕微鏡による観察手技の最適化も行う。さらに、悪性度が異なる乳がんや他のがん細胞でも同様な観察を行い、細胞外小胞の受け渡しの違いによるによるがんの悪性化を理解する。
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| Causes of Carryover |
予定よりプラスミド作製にかかる額が低く、また少ない数のマウスで実験が遂行できた。予算は、次年度に予定しているフローサイトメトリーや組織内の細胞の検出の検討に必要な抗体の購入に充てる。
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