2011 Fiscal Year Annual Research Report
平面培養の時間的三次元化と機能性高分子複合化技術による弾性線維再生医療の実用化
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23249078
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Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
鈴木 茂彦 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (30187728)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
河合 勝也 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (90273458)
内藤 素子 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (30378723)
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| Keywords | 弾性線維 / 三次元培養 / コラーゲンスポンジ / 架橋条件 / 基材 |
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| Research Abstract |
弾性線維の再生に適したコラーゲン基材を開発し、以下の検討を行った。
1) 基材孔経の最適化:
コラーゲン基材の孔径について、平均孔径25μm,50μm,100μmについて検討した。架橋条件は140度熱架橋に統一した。各基材にヒト正常皮膚由来線維芽細胞を播種し、in vitro三次元培養系にて播種後2週間、3週間でサンプリングを行い、弾性線維構成成分(Fibrillin-1、ELASTIN)に対する免疫組織化学的染色を行った。その結果、25μm孔径ではFibrillin-1、ELASTINの染色が認められたが、50μm,100μmでは認められなかった。この結果、平均基材孔径25μｍが弾性線維形成には適していると考えられた（N=6)。
２）基材の架橋条件の最適化：
１）で得られた最適孔径条件下（平均孔径25μm）で、110度熱架橋、120度熱架橋、140度熱架橋、140度熱架橋+グルタールアルデヒド架橋、の4種類で検討した（各条件下にN=3）。評価方法として、in vitro三次元培養系にて、各基材に線維芽細胞播種し、播種後1週間 、2週間、3週間でサンプリングを行い、弾性線維構成成分(Fibrillin-1、ELASTIN)に対する免疫組織化学的染色と、EVG染色を実施した。その結果、当初の予想とはやや異なり、架橋条件として120度熱架橋、あるいは140度熱架橋条件で、Fibrillin-1、ELASTINの染色性が確認され、他の架橋条件したでは染色性が乏しかった。EVG染色ではいずれの条件したでも染色性は確認できなかった。N数がまだ少ないため、120度と140度のいずれが最適であるかは、今後の検討とした。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
基材条件のうち、孔径に関する条件の最適化に成功したため。
また、架橋条件についても、120度熱架橋あるいは、140度熱架橋のいずれか２つに絞ることができたため。
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| Strategy for Future Research Activity |
来年度は、架橋条件の最適化を行う。また、この最適化を実施た基材を用いた三次元培養系で、弾性線維の形成を促進させるような各種生理活性物質を添加し、弾性線維の再生をさらに加速できるかどうかを検討する。
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