Ｂリンパ球レクチンの糖鎖認識と機能

2012 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 23390063
• Research Institution: Tokyo Medical and Dental University
• Principal Investigator: 鍔田 武志 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教授 (80197756)
• Project Period (FY): 2011-11-18 – 2014-03-31
• Keywords: CD72 / Bリンパ球 / シグナル伝達 / 自己抗体 / Sm/RNP / ヘパリン

Research Abstract

前年度に引き続きCD72の糖鎖リガンドの同定を行なった。ヘパリンは硫酸化多糖であり、また、ヘパリン誘導性血小板減少症と呼ばれる病態では、ヘヘパリンに結合する血清タンパクであるPF4とヘパリンの複合体に対する自己抗体産生がおこる。そこで、組み換えCD72タンパク質を用いたELISA法により解析したところ、ヘパリンがCD72の糖鎖リガンドであることが明らかとなった。また、我々は、抗DNA抗体H鎖56Rトランスジェニックマウスにおいて、56R H鎖とVκ38Cからなる免疫グロブリンがSm/RNP抗原に反応することを明らかにした。また、我々はCD72がSm/RNPと反応することを明らかにしたので、CD72がSm/RNP反応性B細胞を制御するかを解析するために、CD72欠損56Rマウスを作成した。このマウスB細胞のVκ38C発現を解析したところ、Vκ38C発現細胞が56Rマウスに比べて有意に増加していることを明らかにし、CD72がSm/RNP反応性B細胞を制御することを明らかにした。さらに、これらのマウスに自己免疫誘導性のFaslpr変異を持つマウスと交配し、CD72欠損56R-lprマウスを作成したところ、Vκ38C陽性細胞が減少するという予想外の結果を得た。しかしながら、このマウスは自己抗体の産生や激しい自己免疫症状を呈することから、自己反応性B細胞が自己抗体産生細胞に分化するために、自己反応性Vκ38C陽性細胞が減少することが示唆された。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

本研究の目的はCD72のリガンドを同定し、その疾患制御での役割を明らかにすることであるが、すでにCD72が全身性エリテマトーデスの疾患発症に関わるSm/RNP抗原に反応することを明らかにし、さらに、我々が開発したSm/RNP反応性B細胞を同定するマウス実験系を用いて、CD72が実際にSm/RNP反応性B細胞の制御に関わることを明らかにした。また、昨年度はCD72に硫酸化糖鎖であるスルファチドが結合することを明らかにし、実際にCD72がスルファチドへの抗体産生を制御することを示したが、疾患との関連を明らかにすることはできなかったので、今年度は、別の硫酸化糖鎖であるヘパリンにCD72が会合することをしめした。これらの成果から、本研究は概ね順調に進展していると判断される。

Strategy for Future Research Activity

これまでに、それぞれCD72が全身性エリテマトーデスおよびヘパリン誘導性血小板減少症での自己抗体の標的分子であるSm/RNP抗原およびヘパリンに反応することを明らかにし、さらに、CD72がSm/RNP反応性B細胞を制御することを明らかにした。これらの成果をもとに、CD72の疾患での役割やまたそのメカニズムの解析を行なう。
まず、CD72とこれらの自己抗体関連抗原への反応がどのようにB細胞の機能を制御するのかを明らかにするために、すべてのB細胞がニトロフェノールに反応する抗原受容体を発現するQMマウスをCD72欠損マウスと交配し、得られたマウスのB細胞をニトロフェノールと複合体を形成したこれら自己抗原と反応させ、シグナル伝達やその他の活性化をCD72が制御するかを明らかにする。また、CD72欠損マウスをヘパリン/PF4複合体で免疫したり、あるいはCD72欠損56R-lprマウス等の全身性エリテマトーデス様自己免疫疾患発症を解析することで、CD72の疾患発症における役割の解明を行なう。

Research Products

• [Journal Article] Functional evaluation of activation-dependent alterations in the sialogylcan composition of T cells. (2014)
  • Author(s): Naito-Matsui, Y., Takada, S., Kano, Y., Iyoda, T., Sugai, M, Shimizu, A., Inaba, K., Nitschke, L., Tsubata, T., Oka, S., Kozutsumi, Y. and Takematsu, H.
  • Journal Title: J. Biol. Chem. Volume: 289 Pages: 1564-1579
  • DOI: 10.1074/jbc.M113.523753.
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Constitutively CD40-activated B cells regulate CD8 T cell inflammatory response by IL-10 induction. (2013)
  • Author(s): Shimoda, M., Bolduc, A., Takezaki, M., Ametani, Y., Huang, L., Nutt S. L., Kamanaka, M., Flavell, R. A., Mellor A. L, Tsubata, T. andKoni, P.
  • Journal Title: J. Immunol. Volume: 190 Pages: 3189-3196
  • DOI: 10.4049/jimmunol.1203364.
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] CD72c is a modifier gene that regulates Faslpr-induced autoimmune disease. (2013)
  • Author(s): Xu, M., Hou, R., Sato-Hayashizaki, A., Man, R., Zhu, C., Wakabayashi, C, Hirose, S., Adachi, T. and Tsubata, T.
  • Journal Title: J. Immunol. Volume: 190 Pages: 5436-5445
  • DOI: 10.4049/jimmunol.1203576.
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Excess CD40L does not rescue anti-DNA B cells from clonal anergy. (2013)
  • Author(s): Aslam, M., Kishi, Y. and Tsubata, T.
  • Journal Title: F1000 Research Volume: 2 Pages: 218
  • DOI: 10.12688/f1000research.2-218.v2.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Apoptotic marginal zone deletion of anti-Sm/ribonucleoprotein B cells. (2012)
  • Author(s): Kishi, Y., Higuchi, T., Phoon, S., Kamiya, K., Riemekasten, G., Akiyoshi, K., Weigert, M. and Tsubata, T.
  • Journal Title: Proc. Natl. Acad. Sci. USA Volume: 109 Pages: 7811-7816.
  • DOI: 10.1073/pnas.1204509109.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy. (2012)
  • Author(s): Klionsky, D.J., Abdalla, F. C. Tsubata, T. et al.
  • Journal Title: Autophagy Volume: 8 Pages: 1-100
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Role of inhibitory BCR co-receptors in immunity. (2012)
  • Author(s): Tsubata, T.
  • Journal Title: Infect Disord Drug Targets Volume: 12 Pages: 181-190
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Apoptotic volume decrease (AVD) is independent of mitochondrial dysfunction and initiator caspase activation. (2012)
  • Author(s): Maeno, E., Tsubata, T. and Okada, Y
  • Journal Title: Cells Volume: 1 Pages: 1156-1167
  • DOI: 10.3390/cells1041156.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Human CD72 splicing isoform responsible for resistance to systemic lupus erythematosus regulates serum immunoglobulin level and is localized in endoplasmic resticulum. (2012)
  • Author(s): Hitomi, Y., Adachi, T., Tsuchiya, N., Honda, Z.-I., Tokunaga, K and Tsubata, T.
  • Journal Title: BMC Immunol. Volume: 13 Pages: 72
  • DOI: 10.1186/1471-2172-13-72.
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Unconventional B cell antigen receptor endocytosis pathway. (2013)
  • Author(s): Takata. T., Tang. M. and Tsubata. T.
  • Organizer: Annual Meeting of the Japanese Society for Immunology
  • Place of Presentation: Chiba
  • Year and Date: 20131211-20131213
• [Presentation] Cd72c is a modifier gene that regulates Faslpr-induced autoimmune disease. (2013)
  • Author(s): Xu. M., Hou. R., Sato-Hayashizaki. A., Man. R-Y., Zhu. C., Wakabayashi. C., Hirose. S., Adachi. T. and Tsubata. T.
  • Organizer: Annual Meeting of the Japanese Society for Immunology
  • Place of Presentation: Chiba
  • Year and Date: 20131211-20131213
• [Presentation] Distinct tolerance mechanisms for anti-DNA and anti-Sm B cells. (2013)
  • Author(s): Mohammad. A. and Tsubata T.
  • Organizer: Annual Meeting of the Japanese Society for Immunology
  • Place of Presentation: Chiba
  • Year and Date: 20131211-20131213
• [Presentation] Glia maturation factor-γ regulates marginal zone B cell migration and humoral immune responses. (2013)
  • Author(s): Li. Y., Hase. K., Tsubata. T. and Wang. J-Y.
  • Organizer: Annual Meeting of the Japanese Society for Immunology
  • Place of Presentation: Chiba
  • Year and Date: 20131211-20131213
• [Presentation] Identification of a putative form of AID that inhibits Ig gene hypermutation. (2013)
  • Author(s): Kano. C., Ohno. H., Tsubata. T. and Wang. J-Y.
  • Organizer: Annual Meeting of the Japanese Society for Immunology
  • Place of Presentation: Chiba
  • Year and Date: 20131211-20131213
• [Presentation] Replenishment of long-live plasma cellsis constitutively restrictedby CD4+ T cells in the ir maintenance phase after influenza vaccination. (2013)
  • Author(s): Onodera. T., Takahashi. Y., Adachi. T., Tsubata. T., Kurosaki. T. and Ato. M.
  • Organizer: Annual Meeting of the Japanese Society for Immunology
  • Place of Presentation: Chiba
  • Year and Date: 20131211-20131213
• [Presentation] SHP-1-activating Receptors in B lymphocytes. (2013)
  • Author(s): Tsubata, T.
  • Organizer: The 2nd Taiwan-Japan Bilateral Conference on Protein Phosphatase
  • Place of Presentation: Hsinchu, Taiwan
  • Year and Date: 20131127-20131129
  • Invited
• [Presentation] CD72の構造解析に向けて (2013)
  • Author(s): 品川健朗、沼本修孝、鍔田武志、伊藤暢聡
  • Organizer: 第51回日本生物物理学会年会
  • Place of Presentation: 京都
  • Year and Date: 20131028-20131030
• [Presentation] Sialic acids and immune responses. (2013)
  • Author(s): Tsubata, T.
  • Organizer: Molecular Frontier Science Conference for Humboltians and DAAD Alumni
  • Place of Presentation: Shanghai, China
  • Year and Date: 20130920-20130922
  • Invited
• [Presentation] CD72cはFas欠損マウスでの自己免疫疾患発症を制御する修飾遺伝子である (2013)
  • Author(s): 鍔田武志
  • Organizer: 第22回日本cell deth 学会学術集会
  • Place of Presentation: 京都
  • Year and Date: 20130719-20130719
  • Invited
• [Presentation] Excess B cell CD40/CD40L signaling promotes CD4 T cell-mediated encephalomyelitis in mice. (2013)
  • Author(s): himoda. M., Bolduc. A., Takezaki. M., Tsubata. T. and Koni. P-A.
  • Organizer: Immunology 2013 AAI Annual meeting.
  • Place of Presentation: Honolulu, U.S.A.
  • Year and Date: 20130503-20130507
• [Presentation] CD72C , a hapolotype encoding the SHP-1-binding B lymphocyte molecule, is a modifier gene for murine lupus (2013)
  • Author(s): Tsubata, T.
  • Organizer: the 10th International Conference on Protein Phosphatase
  • Place of Presentation: Tokyo
  • Year and Date: 20130207-20130209
  • Invited
• [Presentation] 自己抗体産生とアイソタイプ (2013)
  • Author(s): 鍔田武志
  • Organizer: 第20回自己抗体と自己免疫シンポジウム
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 20130202-20130202
  • Invited
• [Presentation] Ｃ型レクチン様分子CD72による硫酸糖鎖への免疫応答の制御 (2012)
  • Author(s): 鍔田武志
  • Organizer: 第85回日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 福岡
  • Year and Date: 20121214-20121216
  • Invited
• [Presentation] Time, place and pathway-specific involvement of reactive oxygen species in B cell antigen receptor signaling. (2012)
  • Author(s): Tang, M., Takata, T., Tsubata, T.
  • Organizer: Annual Meeting of the Japanese Society for Immunology
  • Place of Presentation: Kobe
  • Year and Date: 20121205-20121207
• [Presentation] Excess CD40L specifically perturbs self-tolerance of anti-Sm antibody recognizing the same components as patient-derived antibodies. (2012)
  • Author(s): Kishi, Y., Phoon., S., Tsubata, T.
  • Organizer: Annual Meeting of the Japanese Society for Immunology
  • Place of Presentation: Kobe
  • Year and Date: 20121205-20121207
• [Presentation] Synthesis and biological evaluation of the mimics of cis ligand for CD22 (2012)
  • Author(s): Suganuma, Y., Matsubara, N., Iwayama, Y., Ueki, A., Imamura, A., Ando, H., Tsubata, T., Ishida, H. and Kiso, M.
  • Organizer: The 4th Asian Communication for Glycobiology and Glycotechnology (ACGG)
  • Place of Presentation: Jeju, Korea
  • Year and Date: 20121028-20121031
• [Presentation] 全身性自己免疫疾患と自己トレランス (2012)
  • Author(s): 鍔田武志
  • Organizer: 第四回全国共同利用・共同研究「酵素学研究拠点」シンポジウム
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 20121002-20121002
  • Invited
• [Presentation] シグレックと感染免疫 (2012)
  • Author(s): 鍔田武志
  • Organizer: ５回感染病態研究フロンティア
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 20120804-20120804
  • Invited