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2011 Fiscal Year Annual Research Report

リンパ球チップを用いたウイルス感染症に対する個の免疫医療の基盤技術の開発

Research Project

Project/Area Number 23390264
Research InstitutionUniversity of Toyama

Principal Investigator

村口 篤  富山大学, 大学院・医学薬学研究部(医学), 教授 (20174287)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 岸 裕幸  富山大学, 大学院・医学薬学研究部(医学), 准教授 (60186210)
小澤 龍彦  富山大学, 大学院・医学薬学研究部(医学), 助教 (10432105)
北島 勲  富山大学, 大学院・医学薬学研究部(医学), 教授 (50214797)
二階堂 敏雄  富山大学, 大学院・医学薬学研究部(医学), 教授 (50180568)
Keywords感染症 / リンパ球チップ / 免疫治療 / 抗体遺伝子 / TCR遺伝子
Research Abstract

本研究は、我々が世界に先駆けて独自に開発した「リンパ球チップ」という革新的な抗原特異的リンパ球単離技術を応用し、感染症患者の血液や組織から、病原菌特異的ヒトTリンパ球/Bリンパ球を効率良く同定し、そのリンパ球からT細胞受容体(TCR)/抗体遺伝子を迅速(1-2週間)に単離し、ウイルス感染症に対する個の免疫医療の道を開くための基盤技術を確立することを目的とする。
平成23研究実績は以下のとおりである。
【1】リンパ球チップの改良:磁気盤をチップに配置した磁気チップの最適化を検証した。本成果により、今後、より微量のサンプルをチップで解析することが可能になり、患者を含め血液提供者の負担をより軽減でき、抗体医薬開発と抗原特異的T細胞治療のさらなる加速に向けて貢献できることが期待される。
【2】ISAAC法の改良:ISAAC法を発展させるために、リンパ球をin vitroにてサイトカイン等で刺激することで、それらの細胞を効率よく抗体分泌細胞へ分化させる系を確立した。本成果により、今後目的の抗体を保有している健常人ないし患者に大きな負担をかけることなく、抗体医薬開発に貢献できることが期待される。
【3】ヒト抗体遣伝子解析の迅速化:in vitro蛋白合成系を用いたscFv(抗体が抗原を認識するために必要な最小単位であるVHおよびVL,から構成される可変領域(Fv)をフレキシブルなペプチドリンカーで結合した単鎖可変領域フラグメント)作製による短期間抗原結合性検索システムを開発した。本システムをマイクロアレイシステムー連の行程として自動化し、多数の抗体遺伝子の抗原結合活性を迅速に評価することが可能となった。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

研究計画の4課題のうち、3課題について計画どおり研究が進んだ。また、課題の一つについては、基礎的なデータが蓄積されつつあり、次年度前半には計画が達成されると期待している。

Strategy for Future Research Activity

抗原特異的T細胞の検出することを目的として、3種類の検出法、すなわち、1)MHC/ペプチド五量体(MHC/p)T細胞へ結合させ、セルソータを用いて単一細胞を分離する方法、2)抗原でリンパ球を刺激し、サイトカインの角生を指標にセルソータを用いて単一細胞を分離する方法、3)抗原でリンパ球を刺激し、サイトカイン産生を細胞チップを用いて単一細胞を分離する方法(T-ISAAC法)を確立する。このうち、3)については、MHC/pをどのように可溶性にするかが課題であり、蛋白合成を行う場合はコストが問題となり、膜から単離する場合は技術面の問題がある。解決法としてリポームを利用した方法を検討している。

  • Research Products

    (19 results)

All 2011

All Journal Article (8 results) (of which Peer Reviewed: 8 results) Presentation (10 results) Book (1 results)

  • [Journal Article] Rapid isolation of antigen-specific antibody-secreting cells using a chip-based immunospot array2011

    • Author(s)
      Jin A., et al.
    • Journal Title

      Nat.Protoc.

      Volume: 6 Pages: 668-676

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Characterization of a fully human monoclonal antibody against extracellular domain of matrix protein 2 of influenza A virus2011

    • Author(s)
      Ozawa T., et al.
    • Journal Title

      Antiviral Res.

      Volume: 91 Pages: 283-287

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Novel "eukaryote-made" thermostable DNA polymerase which is free from bacterial DNA contamination2011

    • Author(s)
      Niimi H, et al
    • Journal Title

      Journal of Clinical Microbiology

      Volume: 49 Pages: 3316-3320

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Distribution of serine/threonine kinase SAD-B in mouse pericheral nerve synapse2011

    • Author(s)
      Hagiwara A, et al.
    • Journal Title

      Neuro Report

      Volume: 22 Pages: 319-325

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] A novel Y231del mutation of HFE in hereditary hemochromatosis provides in vivo evidence that the Huh-7 is a human hemochromatotic cell line2011

    • Author(s)
      Takano A, et al.
    • Journal Title

      Liver International

      Volume: 31 Pages: 1593-1594

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Use of a hyper-dried cross-linked amniotic membrane as initial therapy for corneal perforations2011

    • Author(s)
      Kitagawa K., et al
    • Journal Title

      Japanese J Ophthalmol

      Volume: 55 Pages: 16-21

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Effect of hyperdry amniotic membrane patches attached over the bony surface of mastoid cavities in canal wall down tympanoplasty2011

    • Author(s)
      Shojaku H., et al.
    • Journal Title

      Laryngoscope

      Volume: 121(9) Pages: 1953-1957

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Cultured epithelial grafting using human amniotic membrane : the potential for using human amniotic epithelial cells as a cultured oral epithelium sheet2011

    • Author(s)
      Koike T., et al.
    • Journal Title

      Arch Oral Biol

      Volume: 56(10) Pages: 1170-1176

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] A high-throughput method for generating rabbit monoclonal antibodies by immunospot array assay on a chip technology2011

    • Author(s)
      小澤龍彦, 他
    • Organizer
      第34回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      20111213-20111216
  • [Presentation] Generation and characterization of a fully human monoclonal antibody against extracellular domain of matrix protein 2 of influenza A virus : a candidate for antibody therapeutics for a wide range of influenza A viruses2011

    • Author(s)
      Muraguchi A., et al.
    • Organizer
      IBC's 22^<nd> Annual International Conference 'Antibody Engineering'
    • Place of Presentation
      San Diego
    • Year and Date
      20111204-20111208
  • [Presentation] 細胞チップを用いた抗原特異的サイトカイン分泌T細胞の単一細胞レベルでの検出2011

    • Author(s)
      岸裕幸, 他
    • Organizer
      第40回日本免疫学会総会・学術集会
    • Place of Presentation
      千葉
    • Year and Date
      20111127-20111129
  • [Presentation] 可溶化TCRの作製と機能解析2011

    • Author(s)
      小澤龍彦, 他
    • Organizer
      第40回日本免疫学会総会・学術集会
    • Place of Presentation
      千葉
    • Year and Date
      20111127-20111129
  • [Presentation] 単一細胞解析に基づく迅速な抗原特異的T細胞受容体クローニングシステム2011

    • Author(s)
      小林栄治, 他
    • Organizer
      第40回日本免疫学会総会・学術集会
    • Place of Presentation
      千葉
    • Year and Date
      20111127-20111129
  • [Presentation] 迅速なTCR cDNAクローニングシステムを用いたEBV特異的単一T細胞のTCRα/βレパトア解析2011

    • Author(s)
      浜名洋, 他
    • Organizer
      第40回日本免疫学会総会・学術集会
    • Place of Presentation
      千葉
    • Year and Date
      20111127-20111129
  • [Presentation] ISAAC法を用いた迅速かつハイスループットなウサギモノクローナル抗体作成法の開発2011

    • Author(s)
      朴秀虹, 他
    • Organizer
      第40回日本免疫学会総会・学術集会
    • Place of Presentation
      千葉
    • Year and Date
      20111127-20111129
  • [Presentation] Detection of antigen-stimulated cytokine-secretion in T-cells at single cell levels on a live ceU chip2011

    • Author(s)
      Kishi H., et al.
    • Organizer
      26^<th> Annual Meeting of Society for Immunotherapy of Cancer
    • Place of Presentation
      North Bethesda, USA
    • Year and Date
      20111104-20111106
  • [Presentation] The novel method to detect single antibody-secreting B-cells and single cytokine-secreting T-cells using a cell-microarray chip2011

    • Author(s)
      Ozawa T., et al.
    • Organizer
      Cold Spring Harbor Meeting
    • Place of Presentation
      New York
    • Year and Date
      20110722-20110724
  • [Presentation] Single T cell analysis system for rapid cloning and functional evaluation of antigen-specific T cell receptors2011

    • Author(s)
      Kobayashi E., Hamana H., Nagai T ., Horii M., Ozawa T ., Kishi H., Muraguchi A
    • Organizer
      Cold Spring Harbor Asia Conference
    • Place of Presentation
      Suzhou, China
    • Year and Date
      20110524-28
  • [Book] ナノ融合による先進バイオデバイス2011

    • Author(s)
      小澤龍彦, 他
    • Total Pages
      8
    • Publisher
      シーエムシー出版

URL: 

Published: 2013-06-26  

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