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2011 Fiscal Year Research-status Report

臨床検体に基づく実践的生体分子を標的とする天然由来分子標的抗がん剤の探索

Research Project

Project/Area Number 23510284
Research InstitutionHyogo University of Health Sciences

Principal Investigator

青木 俊二  兵庫医療大学, 薬学部, 教授 (60252699)

Project Period (FY) 2011-04-28 – 2015-03-31
KeywordsPCA-1 / DNA脱メチル化酵素 / 前立腺がん / 分子標的抗がん剤 / アポトーシス
Research Abstract

本研究では、ヒトの前立腺がんおよび膵臓がんに高発現が見られ、増悪因子でもあるDNA脱メチル化酵素PCA-1の脱メチル化活性を阻害する化合物のスクリーニングを行った。すなわち、3-メチルシトシン含有オリゴDNAを基質として含むPCA-1酵素反応溶液に蚕リコンビナントFLAG-PCA-1を添加し脱メチル化酵素反応を行う。反応終了後、酵素反応溶液を用いてreal-time PCRを行い、非メチル化オリゴDNAの希釈系列を用いて作成した検量線から酵素活性阻害率を計算した。このアッセイ系を用いて生薬や海綿を中心とする海洋生物の抽出エキス約500種類をスクリーニングした結果、約30種のエキスに活性を認めた。そのうち、活性のみられたアスナロやゴシュユといった生薬の抽出エキスに含まれる活性本体をあきらかにすることとした。活性の見られたエキスは試験の結果を指標に各種クロマトグラフィーにより分画を行ない、最終的にはHPLCを用いて精製することで活性物質としてフラボノイド二量体・putraflavoneやインドール型アルカロイド・evocarpineの単離に成功した。Putraflavoneは、比較的強いPCA-1阻害活性(IC50 = 0.9 μM) を示し、また前立腺がん細胞DU-145に対しても増殖抑制活性(IC50 = 6.0 μM)を示したが、前立腺由来正常様細胞PNT-2に対しても増殖抑制活性を示し、DU-145細胞に対する選択的増殖抑制活性は認められなかった。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

当初計画通り、3-メチルシトシン含有オリゴDNAを基質として、蚕リコンビナントFLAG-PCA-1を酵素として反応を行うアッセイ系を用いて、生薬や海綿を中心とする海洋生物の抽出エキス約500種類をスクリーニングし、活性の見られたエキスから活性物質の単離に成功している。

Strategy for Future Research Activity

前年度に引き続き、海洋生物の抽出エキスライブラリーや生薬の抽出エキスライブラリーからのPCA-1阻害活性物質の単離を継続し、より高活性の物質を探索する。また、前年度に得られた活性物質については、足場非依存性増殖に対する阻害活性を評価し、抗がん剤としての有用性を評価する。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

次年度以降の研究費は、上記研究のための消耗品(溶媒、クロマト用ガラス器具、細胞培養器具、細胞培養用試薬等)の購入予算として計上している。

  • Research Products

    (3 results)

All 2012

All Presentation (2 results) Patent(Industrial Property Rights) (1 results)

  • [Presentation] アスナロ由来のProstate Cancer Antigen-1 (PCA-1) 酵素阻害物質2012

    • Author(s)
      青木俊二
    • Organizer
      日本薬学会第132年会
    • Place of Presentation
      北海道大学(札幌)
    • Year and Date
      2012年3月30日
  • [Presentation] 天然物由来の Prostate Cancer Antigen-1(PCA-1)酵素活性阻 害物質の探索2012

    • Author(s)
      青木俊 二
    • Organizer
      日本薬学会第132年会
    • Place of Presentation
      北海道大学(札幌)
    • Year and Date
      2012年3月30日
  • [Patent(Industrial Property Rights)] 新規ベンズイミダゾール誘導体及びその用途2012

    • Inventor(s)
      青木俊二
    • Industrial Property Rights Holder
      兵庫医療大学
    • Industrial Property Number
      特許: 特願2012-045267
    • Filing Date
      2012年03月10日

URL: 

Published: 2013-07-10  

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