2015 Fiscal Year Annual Research Report
臨床検体に基づく実践的生体分子を標的とする天然由来分子標的抗がん剤の探索
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23510284
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| Research Institution | Hyogo University of Health Sciences |
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Principal Investigator |
青木 俊二 兵庫医療大学, 薬学部, 教授 (60252699)
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2011-04-28 – 2016-03-31
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| Keywords | PCA-1 / DNA脱メチル化酵素 / 前立腺がん / 分子標的抗がん剤 / アポトーシス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
PCA-1は、ヒトの前立腺がんおよび膵臓がんに高発現する新規タンパク質で、それらがんの増悪因子であることが明らかになっている。また、メチル化DNAのDNA脱メチル化酵素活性を有し、その酵素活性ががんの増悪化に大きな役割を果たしていることも明らかになっている。そこで、前立腺がんおよび膵臓がんに対する新しい分子標的抗がん剤を開発する目的で、PCA-1の脱メチル化活性を阻害する化合物のスクリーニングを行った。すなわち、3-メチルシトシン含有オリゴDNAを基質として含むPCA-1酵素反応溶液に蚕リコンビナントFLAG-PCA-1を添加し脱メチル化酵素反応を行う。反応終了後、酵素反応溶液を用いてreal-time PCRを行い、非メチル化オリゴDNAの希釈系列を用いて作成した検量線から酵素活性阻害率を計算した。
このアッセイ系を用いて生薬や海綿を中心とする海洋生物の抽出エキス約500種類をスクリーニングした結果、約30種のエキスに活性を認めた。活性の見られたエキスは試験の結果を指標に各種クロマトグラフィーにより分画を行い、最終的にはHPLCを用いて精製することで活性物質を単離同定した。その結果、アスナロ、ゴシュユ、オトギリソウやチョウジといった生薬の抽出エキスから活性物質としてquercetinやisorhamnetinといったフラボノイド類、フラボノイド二量体putraflavoneやインドール型アルカロイドevocarpineの単離に成功した。さらに、アルカロイド含有生薬に特に注目し、活性の見られたコウボクやタケニグサのアルカロイド含有画分について活性試験の結果を指標に分画を行い、コウボクよりアポルフィン型アルカロイドliriodenineを、タケニグサからはイソキノリン型アルカロイド8-Hydroxydihydro-chelerythrineおよび、 8-methoxydihydrosanguinarineを活性物質として単離同定した。
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