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2013 Fiscal Year Annual Research Report

バイオ燃料電池の実用化に必須である高反応性カソード電極用酵素の研究開発

Research Project

Project/Area Number 23580131
Research InstitutionKanazawa University

Principal Investigator

片岡 邦重  金沢大学, 物質化学系, 教授 (40252712)

Keywordsバイオ燃料電池 / マルチ銅オキシダーゼ / ラッカーゼ / 酵素電極 / 機能改変
Research Abstract

バイオ燃料電池の実用化に資するマルチ銅オキシダーゼの開発を目標に,平成25年度には以下の研究を行った。
1.Clostridium beijerinckii由来の2ドメイン型ラッカーゼ(CbLac)の異種発現と機能解析:CbLacはタイプI銅の酸化還元電位が低いため基質の酸化活性が低く,バイオ燃料電池のカソード極に応用するためにはタイプI銅の酸化還元電位を正にシフトさせる必要があることが明らかになった。Asp281がCbLacのタイプI銅軸位の配位残基であると示唆されたことから,この残基をメチオニンに置換する変異導入を行なったが,変異体は銅を含まないアポ型酵素として発現し,ベクター,ホスト,培養条件等を検討したが活性を持つ変異型酵素は得られなかった。
2.変異導入による既存酵素の機能性向上:昨年度に引き続き大腸菌の一価銅オキシダーゼCueOの排水チャネル近傍への変異導入を行ない,Gln451と共にPhe106が排水チャンネルを構成することを明らかにした。こられの残基を含む排水チャネルへの変異導入により酵素活性を制御できる可能性を示した。また,ビリルビンオキシダーゼのタイプI銅近傍に存在するアミノ酸残基,Asn197, Ser198, Ser231を,Phe, Glu, Hisなどに置換した変異型酵素を作製した。Asn197Phe, Ser198Pheではアミノフェノール型基質に対する活性が野生型酵素に比べて増大するなど,基質特異性が変化することが明らかになった。また,Ser231Asp, Ser231Gluではフェノール型基質に対する相対活性が増大し,Ser231が基質との相互作用に重要であることがわかった。以上の結果から,ビリルビンオキシダーゼにおけるタイプI銅周辺のこれらアミノ酸残基は,電極との反応性を向上させる変異導入の新たなターゲットとなり得ると考えられる。

  • Research Products

    (10 results)

All 2014 2013

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (7 results)

  • [Journal Article] New insights into the catalytic active-site structure of multicopper oxidases2014

    • Author(s)
      Hirofumi Komori, Ryosuke Sugiyama, Kunishige Kataoka, Kentaro Miyazaki, Yoshiki Higuchi, and Takeshi Sakurai
    • Journal Title

      Acta Crystallographica Section D

      Volume: D70 Pages: 772-779

    • DOI

      10.1107/S1399004713033051

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Role of the hydrogen bond connecting the ligands for substrate and type I copper in the cuprous oxidase, CueO2013

    • Author(s)
      Kunishige Kataoka and Takeshi Sakurai
    • Journal Title

      Chemistry Letters

      Volume: 42 Pages: 1102-1104

    • DOI

      10.1246/cl.130422

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Crystal structure of the CueO mutants at Glu506, the key amino acid located in the proton transfer pathway for dioxygen reduction2013

    • Author(s)
      Hirofumi Komori, Takao Kajikawa, Kunishige Kataoka, Yoshiki Higuchi, and Takeshi Sakurai
    • Journal Title

      Biochemical Biophysical Research Communications

      Volume: 438 Pages: 686-690

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2013.07.121

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Clostridium属細菌由来の新規マルチ銅オキシダーゼの異種発現と性質2013

    • Author(s)
      原唯歩, 木村祐二, 谷村孝将, 片岡邦重, 櫻井武
    • Organizer
      錯体化学会 第63回討論会
    • Place of Presentation
      琉球大学
    • Year and Date
      20131102-20131104
  • [Presentation] マルチ銅オキシダーゼの酸素4電子還元における第4の電子ドナーの探索2013

    • Author(s)
      押川直美, 山本萌・築田有紀, 片岡邦重, 櫻井武
    • Organizer
      錯体化学会 第63回討論会
    • Place of Presentation
      琉球大学
    • Year and Date
      20131102-20131104
  • [Presentation] マルチ銅酸化酵素における酸素還元反応中心への水素結合ネットワークによるプロトン輸送2013

    • Author(s)
      片岡邦重, 小森博文, 梶川敬雄, 樋口芳樹, 櫻井武
    • Organizer
      第86回 日本生化学会大会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜
    • Year and Date
      20130911-20130913
  • [Presentation] ビリルビンオキシダーゼの酸素還元部位近傍に配置されたTrp132への変異導入2013

    • Author(s)
      押川直美, 築田有紀, 片岡邦重, 櫻井武
    • Organizer
      第86回 日本生化学会大会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜
    • Year and Date
      20130911-20130913
  • [Presentation] Contribution from a tryptophan residue stacked on the histidine ligand to a type III copper in multicopper oxidases on the four-electron reduction process of dioxygen2013

    • Author(s)
      山本萌, 築田有紀, 片岡邦重, 櫻井武
    • Organizer
      第23回 金属の関与する生体関連反応シンポジウム
    • Place of Presentation
      武蔵野大学
    • Year and Date
      20130621-20130622
  • [Presentation] マルチ銅酸化酵素CueOにおける酸素還元反応中心へのプロトン輸送経路2013

    • Author(s)
      片岡邦重, 梶川敬雄, 小森博文, 樋口芳樹, 櫻井武
    • Organizer
      2013年度 酵素補酵素研究会
    • Place of Presentation
      立命館大学
    • Year and Date
      20130621-20130622
  • [Presentation] マルチ銅オキシダーゼCueOの三核銅部位近傍に配置された酸性アミノ酸残基の酸素4電子還元における役割2013

    • Author(s)
      櫻井武, 小森博文, 梶川敬雄, 片岡邦重, 樋口芳樹
    • Organizer
      第40回 生体分子科学討論会
    • Place of Presentation
      大阪大学
    • Year and Date
      20130607-20130608

URL: 

Published: 2015-05-28  

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