2012 Fiscal Year Research-status Report
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23590209
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| Research Institution | Kinki University |
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Principal Investigator |
三田村 邦子 近畿大学, 薬学部, 准教授 (70242526)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
池川 繁男 近畿大学, 薬学部, 教授 (90111301)
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| Keywords | 胆汁酸 / プロドラッグ / N-アセチルシステイン / グルタチオン / システイン / グルタミン / LC/MS / 尿排泄 |
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| Research Abstract |
本年度は、23年度の研究成果を踏まえ、以下の基礎的検討を行った。
1. UDCA-NACを投与したラットの尿中代謝物をLC/MSにより追跡し、主にNACが脱抱合された後グリシンあるいはタウリン抱合体へと変換された代謝物として排泄されていることを明らかとした。これは昨年度in vitroにおけるNAC抱合型胆汁酸の硫酸抱合に関する知見と符合するものであった。
2. 胆汁酸の新規誘導体で、尿中代謝物としても推測されるグルタミン抱合体標品を合成し、LC/ESI-MS/MSにおける特徴的イオンの生成を精査するとともに、その定量法を開発した。本結果は、今後、生体試料中グルタミン抱合型胆汁酸の定量法の開発や生成機構の解明上有用な知見となった。
3. N-アセチルシステイン（NAC）抱合型並びにグルタチオン（GSK）抱合型胆汁酸の代謝物として予測されるシステイン、グリシルシステイン、グルタミルシステイン抱合型胆汁酸標品を合成し、LC/ESI-MS/MSにおいて生成するイオンを精査したところ、構造を反映する複数の特徴的イオンが出現することが明らかとなった。これは今後、高感度測定法を開発する上で有用な知見である。
4. UDCA親和タンパク質の捕捉を目的とした前処理基材合成のため、UDCAの3位水酸基、7位水酸基あるいは24位カルボキシ基から架橋を伸ばしたリガンドの調製に成功した。本リガンドは今後UDCAの生理機能に関わるターゲットタンパク質を捕捉し、新たなシーズを発見するうえで有用なツールとなるであろう。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
24年度は1)UDCA-NACの体内動態解析、2）UDCA-NACの薬理学的検討、3)胆汁酸誘導体の合成、4)UDCA親和タンパク質の補足を目的としたリガンドの合成を計画していた。このうち1)に関しては尿中代謝物についての検討を行い、有用な知見を得た。3）に関しては、新規アシル化誘導体であるシステイン、グリシルシステイン、グルタミルシステイン並びにグルタミン抱合体など数種の合成に成功した。4)に関しても同様に合成に成功した。しかしながら2）については個体差が大きく、統計的な結果が得られず今後に課題を残した。
以上の観点から、「おおむね順調に進展している」と評価した。
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| Strategy for Future Research Activity |
25年度は本助成金の最終年度として、以下の点を重点的に進展させ、研究の総括を行う予定である。
1）UDCAとNACを投与したラットではグルタチオン抱合型UDCAが胆汁中に排出されることをすでに明らかにしているが、その生成メカニズムを解明されていない。そこで、重水素標識NAC（d3-NAC）を合成し、これをUDCAと縮合させて、UDCA-d3-NACを合成し、LC/MS/MSにより生成する特徴的イオンを精査するとともに、定量法を開発する。次いでシステインほか合成した誘導体とともに、in vitro、in vivoにおける生成に検討を加える。
2）UDCA親和タンパク質のLC/MSによる同定。24年度に合成したUDCAリガンドを不溶性担体に固定し、UDCA親和タンパク質捕捉用アフィニティー基材を調製し、これによりラット肝組織、細胞あるいはヒト肝細胞画分中タンパク質に含まれるUDCA親和タンパク質を捕捉しその構造をLC/MS/MSにより同定する。
3）研究の総括。これまでに得られた結果から、UDCA-NACおよび他の誘導体についてそのプロドラッグとしての可能性を考察する。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
該当なし。
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