2013 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子導入による間葉系幹細胞の肝修復再生能プログラミングと肝再生療法への応用
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23590968
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
酒井 佳夫 金沢大学, 医学系, 准教授 (80401925)
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| Keywords | 肝臓学 / 肝再生 |
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| Research Abstract |
脂肪組織由来間質細胞への遺伝子導入による肝細胞への分化誘導を試みる研究を行った。脂肪組織由来間質細胞は、C57Bl/6J♂の鼡けい部脂肪組織より間葉系間質細胞を酵素処理にて分離、継代、培養し獲得した。CMVプロモーター下にGFPタグ付HNF4aあるいはHNF1bを発現するプラスミド(pCMV6-HNF4a-GFP, pCMV6-HNF1b-GFP、OriGene)を、Nucleofector~TM 2b (Lonza)を用いてエレクトロポレーション法にて導入を行った。継代8代の脂肪組織由来間質細胞に対して5 microgramのpCMV6-HNF4a-GFP、pCMV6-HNF1b-GFPプラスミドをエレクトロポレーション法にて導入を試みたところ、細胞生存率はそれぞれ16.0%、19.4%であった。遺伝子導入後３日目においてFACSにて評価したところ、16.5%、17.4%の細胞がGFP陽性であった。導入後15日目において細胞を回収、RNAを精製し、リアルタイムPCRにて遺伝子発現解析を行った。コントロール細胞として、マウス肝細胞株H2.35、マウス肝細胞癌株Hepa1-6を用いた。H2.35およびHepa1-6のHNF4a発現は、relative ratio to GAPDHでそれぞれ0.00065、0.00745であった。HNF4aの発現pCMV6-HNF4a-GFPを導入した細胞では、H2.35よりも高いrelative ratio to GAPDH = 0.00148のHNF4aの発現を認めた。しかしながらAlbumin発現は見られなかった。pCMV6-HNF1b-GFPを導入した細胞については、HNF1bの発現、Albuminの発現双方認められなかった。脂肪組織由来間質細胞への遺伝子導入による肝細胞分化には、改良が必要であることが明らかとなった。
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[Journal Article] Adipose tissue derived stromal stem cell therapy in murine ConA-derived hepatitis is dependent on myeloid-lineage and CD4+ T-cell suppression.2013
Author(s)
Higashimoto M, Sakai Y, Takamura M, Usui S, Nasti A, Yoshida K, Seki A, Komura T, Honda M, Wada T, Furuichi K, Ochiya T, Kaneko S.
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Journal Title
Eur J Immunol
Volume: 43
Pages: 2956-68
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Adipose tissue-derived stem cells as a regenerative therapy for a mouse steatohepatitis-induced cirrhosis model.2013
Author(s)
Seki A, Sakai Y, Komura T, Nasti A, Yoshida K, Higashimoto M, Honda M, Usui S, Takamura M, Takamura T, Ochiya T, Furuichi K, Wada T, Kaneko S.
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Journal Title
Hepatology
Volume: 58
Pages: 1133-1142
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] Features of immunomodulatory and therapeutic effects of mesenchymal stromal/stem cells on non-alcoholic steatohepatitis murine model in early and cirrhotic phases.
Author(s)
Akihiro Seki, Yoshio Sakai, Mami Higashimoto, Takuya Komura, Alessandro Nasti, Keiko Yoshida, Takahiro Ochiya, Takashi Wada, Masao Honda, Shuichi Kaneko.
Organizer
The 64th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases
Place of Presentation
Washington D.C., U.S.A.
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