2012 Fiscal Year Research-status Report
骨髄微小環境下におけるＡＭＬ幹細胞のチロシンキナーゼ阻害剤耐性機構の解明
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23591537
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
嶋田 明 岡山大学, 大学病院, 講師 (70391836)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
林 泰秀 群馬県衛生環境研究所, 研究企画係, 研究員 (30238133)
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| Keywords | AML / チロシンキナーゼ / 薬剤耐性 / FLT3 / 骨髄微小環境 / JAK阻害剤 / 抗メチル化薬 |
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| Research Abstract |
急性骨髄性白血病(AML)のTKI耐性メカニズムを調べるため、慢性骨髄性白血病(CML)や骨髄増殖性疾患（MPN)についても検討を行った。
１）AML細胞株のMV4-11,THP1, U937を使って、TKIとPI3K/mTOR/AKT阻害剤との組み合わせにシナジー効果があることをMTTアッセイとapoptosisの系で見出した。これはPI3K/mTPORのdual inhibitorであるPI103やBEZ235でより顕著で、MSCとの共培養系でもシナジー効果がみられた。
２）CML細胞株K562とAML細胞株MV4-11でTKIとJAK/STAT阻害剤のシナジー効果を確認した。K562ではImatinib, Dasatnib, NilotinibともにJAK/STAT阻害剤であるCuIとシナジー効果を示し、MV4-11ではSorafenib, Sunitinib, PKC412ともにCuIとシナジー効果を示した。
３）AML, CML細胞株でTKIを3ヶ月添加し濃度依存的にTKI耐性株を作成したが、FLT3やABLに新たな変異はみられなかったが、NRASのcodon12の変異を新たに獲得した。また経過中巨細胞が出現し、mitotic catastropheを起こしている可能性が示唆された。
AMLではFLT3以外の他のシグナルPI3K/mTOR/AKT、JAK/STAT系、MAPK系への依存度も高いと考えたため、その他のシグナルの同時抑制が重要と考えた。またCMLでImatinibを長期に使用した患者さんの中で骨髄異形成症候群 (MDS)様病態を呈したり、染色体異常がみられる症例もあり、TKIによるmitotic catastropheがその一因となっているものと考えられた。
４）小児のMPNにおいてもJAKV617F変異が一定割合でみられた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
LSCの同定はフローサイトによるCD34+CD38-細胞、Side Population細胞（SP細胞）、aldefluor法による同定を数例でおこなったが、必ずしも同一な細胞集団を示していなかった。また細胞集団が非常に少なく、同定に困難を来している。SP細胞の増幅に関しても、MSCとの共培養系に低酸素条件や、三次元培養など組み合わせているが、SP細胞の著しい増加はみられていない。このため。コロニーアッセイでの系に変更し、またTKIとシナジー効果を示す薬剤の探索を精力的に進めた。
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| Strategy for Future Research Activity |
MSC細胞株を用いた白血病細胞との長期共培養系の確立を目指すが、本方法が難しい場合は、白血病細胞によるコロニーアッセイを行い、コロニーに対してTKI, PI3K阻害剤、JAK阻害剤、抗メチル化薬などの増殖抑制効果を検討する予定である。今後PI3Kδ特異的阻害薬であるIC486068やIC87114は毒性が少ないことから、シナジー効果の確認を行う。またJAK阻害剤であるTofatinibが臨床応用可能となっており、今後Tofatinibとのシナジー効果の確認を行う。あわせてTKIによるmitotic catastropheのメカニズムの研究や、抗メチル化薬についても検討を行う。またMPNにおけるJAK阻害剤についても検討する予定である。次年度使用額(B-A)91,416円が生じた理由については、当初購入を予定して、本年度使用予定の物品があったが、購入しなかったためで、次年度に購入予定である。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
研究費はほとんど消耗品の購入に充てられ、設備備品の購入の予定はない。消耗品としては、チロシンキナーゼ阻害剤、PI3K/mTOR阻害剤、JAK阻害剤、抗メチル化薬、DNA、RNA抽出キット、PCR試薬，シークエンス用試薬、パイロシークエンス用試薬、細胞培養メディウム、フローサイト用抗体、リン酸化タンパク解析キットなどの消耗品を購入予定である。
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Research Products
(10 results)
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[Journal Article] Outcome in 146 patients with pediatric acute myeloid leukemia treated with AML99 protocol in the period 2003-2006 in Japan Association of Childhood Leukemia Study (JACLS)2012
Author(s)
Imamura T, Iwamoto S, Kanai R, Shimada A, Terui K, Ohsugi Y, Kobayashi R, Tawa A, Kosaka Y, Kato K, Hari H, Horibe K, Oda M, Adachi S, for the Japan Association of Childhood Leukemia Study (JACLS).
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Journal Title
Br J Haematol
Volume: 159
Pages: 204-10
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Clinical Characteristics and Outcome of Refractory/Relapsed Myeloid Leukemia in Children with Down Syndrome2012
Author(s)
Taga T, Saito M. A, Kudo K, Tomizawa D, Terui K, Moritake H, Kinoshita A, Iwamoto S, Nakayama H, Takahashi H, Tawa A, Shimada A, Taki T, Kigasawa H, Koh K, and Adachi S.
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Journal Title
Blood
Volume: 120
Pages: 1810-5
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] High WT1 mRNA expression after induction chemotherapy and FLT3-ITD have prognostic impact in pediatric acute myeloid leukemia: A study of the Japanese Childhood AML Cooperative Study Group2012
Author(s)
Akira Shimada, Tomohiko Taki, Daisuke Koga, Ken Tabuchi, Akio Tawa, Ryoji Hanada, Masahiro Tsuchida, Keizo Horibe, Ichiro Tsukimoto, Souichi Adachi, Seiji Kojima, Yasuhide Hayashi
Organizer
WT1 International Symposium
Place of Presentation
Kyoto
Year and Date
20121123-20121124
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[Presentation] De novo childhood Myelodysplastic/myeloproliferative unclassifiable disease with unique molecular characteristics2012
Author(s)
Shimada A, Ismael O, Hama A, Muramatsu H, Sakaguchi H, Tanaka M, Takahashi Y, Yinyan X, Fukuda M, Miyajima Y, Yamashita Y, Horibe K, Hanada R, Ito M, Kojima S
Organizer
EWOG-MDS 2012
Place of Presentation
Pratz/チェコ共和国
Year and Date
20121107-20121110
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