2013 Fiscal Year Research-status Report

Ｐｌａｋｉｎ　Ｆａｍｉｌｙ蛋白発現制御による肝内胆管癌治療戦略

Research Project

Project/Area Number	23592001
Research Institution	Hyogo Medical University
Principal Investigator	宇山直樹兵庫医科大学, 医学部, 研究生 (研究員) (70402873)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	藤元治朗兵庫医科大学, 医学部, 教授 (90199373) 飯室勇二兵庫医科大学, 医学部, 教授 (30252018) 平野公通兵庫医科大学, 医学部, 講師 (90340968) 佐竹真兵庫医科大学, 医学部, 助教 (70399153)
Keywords	肝内胆管癌 / Plakin Family / 癌関連繊維芽細胞 / 増殖能 / 転移能
Research Abstract	Plakin Family タンパクにはPlectin Desmoplakin BPAG-1 MACF Envoplakin Periplakin Epiplakinなどがあり、これらのタンパクの存在に注目し免疫染色を行ったところ、Plectin, Desmoplakin, BPAG-1 MACFの発現を肝内胆管癌組織に認めた。また、Plectin Desmoplakinは癌細胞以外に癌組織内繊維芽細胞（CAF）および非癌部門脈周囲繊維芽細胞にも発現を認めたため、この二種類のタンパクに絞って研究を進めた。Plectinは、半接着班の細胞膜裏打ちタンパクで、細胞骨格タンパクである中間系フィラメントであるケラチン細胞膜貫通タンパクであるintegrin alpha 6 beta4と結合している。組織における免疫染色においてもケラチン、integrin alpha 6、integrin beta4の発現を癌細胞およびCAFに認め、癌細胞セルラインにおいてもこれらのタンパクの発現を確認した。また、Desmoplakinは細胞間接着にかかわる接着班の細胞膜裏打ちタンパクで、細胞骨格タンパクである中間系フィラメントであるケラチン細胞膜貫通タンパクであると結合している。組織における免疫染色においてケラチン、desmocollin desmogleinの発現を癌細胞に認め、癌細胞セルライン遺伝子発現においても発現していることを確認した。 Plectin, Desmoplakin,の遺伝子発現抑制実験を癌細胞セルラインを用いて行ったが、明らかな増殖抑制は認めなかった。現在、integrin alpha 6、integrin beta4, desmocollin desmogleinの発現抑制実験を行っている。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 3: Progress in research has been slightly delayed. Reason 免疫染色の時間がかかっているが、integrin alpha 6、integrin beta4, desmocollin desmogleinの発現抑制実験は順調に進んでいる。　研究期間を一年伸ばしていただいたので、来年にはいい結果が報告できると確信している。
Strategy for Future Research Activity	現在、integrin alpha 6、integrin beta4, desmocollin , desmogleinの発現抑制実験を行っている。予備実験では発現抑制にかかわっているように思える。かかわっている結果が出れば、増殖シグナルMAPK pathway, PI3-Akt pathwayへの関与を調べる予定である。また、繊維芽細胞におけるこれらのタンパクの役割に関しても調べる予定である。
Expenditure Plans for the Next FY Research Funding	免疫染色にて実験が遅れている。　現在、integrin alpha 6、integrin beta4, desmocollin , desmogleinの発現抑制実験を行っている。予備実験では発現抑制にかかわっているように思える。延長して実験を続ける意味があると考えている。 Plectin 結合タンパクのintegrin alpha 6、integrin beta4,desmoplakin 結合タンパクの desmocollin , desmogleinの発現抑制実験にて培養癌細胞セルラインにsiRNA をtransfection する予定である。発現抑制実験におけるMAPK pathway, PI3-Akt pathwayのリン酸化抑制を調べる予定である。組織を用いた実験では、共焦点顕微鏡を用いて蛍光二重免染にて局在、共在の確認を行う予定である。繊維芽細胞においても同様の実験を行う予定である。