2012 Fiscal Year Research-status Report
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23592594
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| Research Institution | St. Marianna University School of Medicine |
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Principal Investigator |
高木 均 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (70283596)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
北岡 康史 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 講師 (10367352)
宗正 泰成 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 助教 (30440340)
上野 聰樹 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (20109010)
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| Keywords | フェノフィブラート / 血管内皮 |
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| Research Abstract |
本研究ではFIELD(The Fenofibrate Intervention and Event Lowering in Diabetes Trial)試験により明らかにされたフェノフィブレートの網膜症治療効果のメカニズムを明らかにすることにより、新規の網膜症発症機序を明らかにし、治療法を探索することを目的とする。フェノフィブラートがもともと核内転写因子PPARαのリガンドであることより、PPARα関連の網膜血管障害機序を明らかにすべく、ヒト網膜血管内皮細胞（ＨＲＥＣ）とヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）の培養を行い、PPARaリガンドによる刺激後、細胞融解し、細胞タンパク質、核タンパク質、mRNA,を分離精製した。PPARaリガンドの影響を確認することを目的としてPPARaの標的遺伝子のmRNAをRT-QPCRにて定量し、リガンド刺激によってPPARaが活性化されていることを確認した。
リガンド刺激によりPPARaが活性化した細胞からRNAを抽出し、DNAマイクロアレイを行いゲノムワイドに解析を行った。その結果、PPARaを刺激することで炎症系の遺伝子が減少し、抗炎症作用のある遺伝子が上昇していることを確認した。今後はPPARaのモノクローナル抗体を用いてクロマチン免疫沈降を行い、抽出したDNAを次世代シーケンサーによって解析することで、これらの遺伝子がPPARaによって直接転写制御が行われているか確認を行う。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本研究ではPPARαdependentなメカニズムをゲノムワイドに解析するために、DNAマイクロアレイとChIPシークエンスによる解析を予定していた。現在DNAマイクロアレイによる解析によって、PPARaの抗炎症作用が示された。ChIPシークエンス用のDNAの抽出は完了しており、今後は次世代シークエンサ-による解析を行う予定であることから、概ね研究は予定に沿って推移している
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度においてはゲノムワイドな解析によって同定された遺伝子やPPARaのノックダウン細胞を作製し、PPARa活性化によって生じる抗炎症作用のメカニズムや、発現型の検討をRT-QPCRや単球細胞との共培養のassayで行う。さらにinvivoの実験系を用いて、眼内におけるPPARa活性化による抗炎症作用をRT-QPCRやウエスタンブロットを用いて評価を行う予定である。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
酸素、動物の購入、飼育料にも費用を要する。
遺伝子包括的解析に次世代シークエンサ-を用いるが、そのランニングコストを要する。同定した遺伝子の制御について定量解析を行うがRT-QＰＣＲとウエスタンブロット、ELISA法により同定するため、その消耗品、試薬費用を要する。
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[Journal Article] Photoreceptor outer segment length: a prognostic factor for idiopathic epiretinal membrane surgery.2013
Author(s)
Shiono A, Kogo J, Klose G, Takeda H, Ueno H, Tokuda N, Inoue J, Matsuzawa A, Kayama N, Ueno S, Takagi H.
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Journal Title
Ophthalmology
Volume: 120
Pages: 788-494
DOI
Peer Reviewed
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