2013 Fiscal Year Annual Research Report
汎用性の高い特異的組織・細胞破壊システムを用いた歯形成不全マウスの作製と応用
| Project/Area Number |
23592892
|
|---|
| Research Institution | Kagoshima University |
|---|
Principal Investigator |
松本 祐子 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, 助教 (20315443)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
佐藤 正宏 鹿児島大学, 医用ミニブタ先端医療開発研究センター・遺伝子発現制御学分野, 教授 (30287099)
齊藤 一誠 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (90404540)
山崎 要一 鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (30200645)
野口 洋文 独立行政法人国立病院機構(千葉東病院臨床研究センター), 外科・移植再生学, 研究員 (50378733)
齊藤 陽子 新潟大学, 医歯学総合病院, 助教 (30404487)
稲田 絵美 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, 助教 (30448568)
|
|---|
| Keywords | 歯形成 / ameloblast / odontblast / Tgマウス |
|---|
| Research Abstract |
本研究課題の目的は、ジフテリア毒素A鎖（以下、DT-A）遺伝子をエナメル芽細胞特異的な遺伝子であるamelogeninのプロモーターの制御下で発現させたマウス個体を作成することにより、遺伝的に歯形成不全をきたすマウスを作成し、それを用いて歯形成メカニズム解明、歯再生へ向けた基盤研究を行うことである。
歯形成細胞特異的にDT-A遺伝子を発現するプラスミドの作製として、amelogenin promoterの下流に赤蛍光遺伝子（RFP）とCre遺伝子を繋げた構築体（pARIC）を作成した。pARICはエナメル芽細胞などの細胞内に導入されると、amelogenin promoterが稼働し、下流にあるRFPが発現する。即ち、赤蛍光を発する。同時にCre蛋白も発現する。本プラスミドの作動性（Cre-loxP系を介した目的遺伝子の発現誘導）を確認するため、pARICとpCETZ-17（ubiquitousなCAG promoter + loxP + EGFP cDNA + stopper + loxP + lacZ gene + poly(A) sites）とを生後2週のマウス口蓋部に注入し、in vivo electroporationによる歯構成細胞への遺伝子導入を行った。その結果、lacZ遺伝子が発動した。これは、amelogenin promoterによりCre遺伝子が発現し、これがpCETZ-17内のloxPで挟まれたEGFP cDNA + stopperを除去した結果、下流のlacZ遺伝子（目的遺伝子）が発現誘導されたからと思われる。これにより、pARICの作動性が確認された。
現在、ARIC transgeneをマウス受精卵核に導入し、ARIC transgenicマウス系統を確立しようとしている。将来的には、CETD-2系統（CAG promoter + loxP + EGFP cDNA + stopper + DT-A gene + poly(A) sitesから構成されるtransgenesを内蔵；すでに樹立）と交配させる予定。
|
-
-
-
-
-
-
-
-
[Presentation] ヒト乳歯歯髄由来iPS細胞樹立におけるフィーダー細胞選択の重要性2013
Author(s)
村上智哉, 齊藤一誠, 稲田絵美, 岩瀬陽子, 長谷川大子, 窪田直子, 松本祐子, 大島邦子, 岡 暁子, 山崎要一, 早崎治明
Organizer
第５１回日本小児歯科学会
Place of Presentation
岐阜県
Year and Date
20130522-20130525
