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2012 Fiscal Year Research-status Report

細菌進化におけるリコンビネーションの頻度と特性に関する研究

Research Project

Project/Area Number 23651183
Research InstitutionTohoku University

Principal Investigator

大坪 嘉行  東北大学, 生命科学研究科, 助教 (40342761)

Keywordsリコンビネーション / ビフェニル資化能 / 協奏進化
Research Abstract

細菌細胞内では、お互いに全く同じであるかあるいは高い相同性を有する配列が複数存在すると、その配列がリコンビネーションによって同調することが推測される。細菌細胞内で起こることが推定されるリコンビネーションについてその頻度を測定するために2つの実験系を構築した。Burkholderia multivorans ATCC 17616株は5コピーのribosomal RNA遺伝子、11コピーのISBmu2を有している。5つの16S rRNA遺伝子の配列のうち、5コピーの間に全く差異がない部分に数塩基の変異を導入したものを作成し、これを相同組換えによって17616株に組み込んだ株を作製した。また同様に、ISBmu2の配列に数塩基の変異を導入したものもを17616株に組み込んだ株を作製した。これらの株の培養を行い、導入した変異がどのような速度で消失するかを測定することで、細胞内のリコンビネーションによる配列同調を定量的、定性的に明らかにすることができると期待される。
一方、細胞間リコンビネーションについて明らかにするための実験系の構築を行った。すなわち、ATCC 17616株由来のビフェニル資化性株について、紫外線照射および変異源処理によってビフェニルを単一炭素源として生育できない変異株を複数取得した。これらの欠損株はビフェニル資化性遺伝子あるいはアミノ酸生合成遺伝子などの何らかの遺伝子に変異を有するものと推測される。今後、これら変異株それぞれを解析するとともに、これらを混合してインキュベーションした後、ビフェニルを単一炭素源として生育できる株を取得し、リコンビネーションが、生育能を回復した株の発生に関与したかどうかについて明らかにする。
また、2つの株間のリコンビネーションの頻度を測定するため17616株とB. lata 383株を混合し、滅菌土壌に接種し、培養を開始した。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

定量的PCRによって頻度を測定可能な系の構築に成功している。これにより今後、簡便にDNA配列の同調を定量的に評価することができる。また配列の同調がより高い頻度で起こることが想定される実験系を構築した。また今後の解析に必要となるソフトウエアについても機能拡充等を行い、利便性がいっそう向上している。

Strategy for Future Research Activity

作製した実験系を用いて細胞内、細胞間のリコンビネーション頻度を明らかにする。また、17616株と383株の混合実験では、経時的に17616株を回収し、ゲノム配列に起きた変異の解析をイルミナシーケンサーによって行う。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

次年度使用額は、今年度の研究を効率的に推進したことに伴い発生した未使用額であり、平成25年度請求額と併せ、平成25年度の研究遂行に使用する予定である。

  • Research Products

    (35 results)

All 2013 2012 Other

All Journal Article (6 results) (of which Peer Reviewed: 6 results) Presentation (27 results) Remarks (2 results)

  • [Journal Article] Cointegrate-resolution of toluene-catabolic transposon Tn4651: determination of crossover site and the segment required for full resolution activity.2013

    • Author(s)
      Yano H, Genka H, Ohtsubo Y, Nagata Y, Top EM, Tsuda M.
    • Journal Title

      Plasmid

      Volume: 69(1) Pages: 24-35

    • DOI

      10.1016/j.plasmid.2012.07.004.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Complete Genome Sequence of a Propionibacterium acnes Isolate from a Sarcoidosis Patient.2013

    • Author(s)
      Minegishi K, Aikawa C, Furukawa A, Watanabe T, Nakano T, Ogura Y, Ohtsubo Y, Kurokawa K, Hayashi T, Maruyama F, Nakagawa I, Eishi Y.
    • Journal Title

      Genome Announc

      Volume: 1 Pages: 00016-12

    • DOI

      10.1128/genomeA.00016-12.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Complete genome sequence of Acidovorax sp. strain KKS102, a polychlorinated-biphenyl degrader.2012

    • Author(s)
      Ohtsubo Y, Maruyama F, Mitsui H, Nagata Y, Tsuda M.
    • Journal Title

      J Bacteriol

      Volume: 194(24) Pages: 6970-6971

    • DOI

      10.1128/JB.01848-12.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Conjugal transfer of polychlorinated biphenyl/biphenyl degradation genes in Acidovorax sp. strain KKS102, which are located on an integrative and conjugative element.2012

    • Author(s)
      Ohtsubo Y, Ishibashi Y, Naganawa H, Hirokawa S, Atobe S, Nagata Y, Tsuda M.
    • Journal Title

      J Bacteriol

      Volume: 194(16) Pages: 4237-4248

    • DOI

      10.1128/JB.00352-12.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Suppression of pleiotropic phenotypes of a Burkholderia multivorans fur mutant by oxyR mutation.2012

    • Author(s)
      Kimura A, Yuhara S, Ohtsubo Y, Nagata Y, Tsuda M.
    • Journal Title

      Microbiology

      Volume: 158 Pages: 1284-1293

    • DOI

      10.1099/mic.0.057372-0

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Pivotal role of anthranilate dioxygenase genes in the adaptation of Burkholderia multivorans ATCC 17616 in soil.2012

    • Author(s)
      Nishiyama E, Ohtsubo Y, Yamamoto Y, Nagata Y, Tsuda M.
    • Journal Title

      FEMS Microbiol Lett.

      Volume: 330 Pages: 46-55

    • DOI

      10.1111/j.1574-6968.2012.02532.x.

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 人為起源物質分解細菌の出現と進化2013

    • Author(s)
      永田裕二
    • Organizer
      日本農芸化学会 第20回記念フロンティアシンポジウム
    • Place of Presentation
      仙台
    • Year and Date
      20130327-20130327
  • [Presentation] 芳香族化合物複合汚染土壌における新規芳香族化合物分解酵素遺伝子 の機能相補に基づく探索2013

    • Author(s)
      永山浩史ら
    • Organizer
      日本農芸化学会2013年大会
    • Place of Presentation
      仙台
    • Year and Date
      20130324-20130327
  • [Presentation] 人為起源環境汚染物質分解能を有するスフィンゴモナス細菌群の ゲノムと可動性遺伝因子に関する研究2013

    • Author(s)
      永田裕二ら
    • Organizer
      日本農芸化学会2013年大会
    • Place of Presentation
      仙台
    • Year and Date
      20130324-20130327
  • [Presentation] 多様な細菌のゲノム上に存在するハロアルカンデハロゲナーゼの 機能解析2013

    • Author(s)
      田中裕興ら
    • Organizer
      日本農芸化学会2013年大会
    • Place of Presentation
      仙台
    • Year and Date
      20130324-20130327
  • [Presentation] IncP-9群 NAH7接合伝達系のoriTを中心とした解析2013

    • Author(s)
      岸田康平ら
    • Organizer
      日本農芸化学会2013年大会
    • Place of Presentation
      仙台
    • Year and Date
      20130324-20130327
  • [Presentation] フィニッシング支援ツールGenoFinisherとAceFileViewer2013

    • Author(s)
      大坪嘉行ら
    • Organizer
      日本農芸化学会2013年大会
    • Place of Presentation
      仙台
    • Year and Date
      20130324-20130327
  • [Presentation] γ-HCH分解細菌Sphingomonas sp. MM-1株が有する多重プラスミドに 関する研究2013

    • Author(s)
      田端理朗ら
    • Organizer
      日本農芸化学会2013年大会
    • Place of Presentation
      仙台
    • Year and Date
      20130324-20130327
  • [Presentation] リダクターゼ機能相補による新規芳香族化合物分解酵素遺伝子の 芳香族化合物複合汚染土壌メタゲノムからの探索2013

    • Author(s)
      永山浩史ら
    • Organizer
      第7回日本ゲノム微生物学会年会
    • Place of Presentation
      長浜
    • Year and Date
      20130308-20130310
  • [Presentation] 土壌細菌Burkholderia multivorans ATCC17616株におけるFurの機能及び発現制御機構の解析2013

    • Author(s)
      佐藤拓哉ら
    • Organizer
      第7回日本ゲノム微生物学会年会
    • Place of Presentation
      長浜
    • Year and Date
      20130308-20130310
  • [Presentation] gamma-HCH分解能を示すSphingobium属細菌のTKS株とMI1205株の 全ゲノム配列決定とgamma-HCH分解関与遺伝子群周辺領域の解析2013

    • Author(s)
      大畑智史ら
    • Organizer
      第7回日本ゲノム微生物学会年会
    • Place of Presentation
      長浜
    • Year and Date
      20130308-20130310
  • [Presentation] 人為起源物質分解能を有するsphingomonad細菌群のゲノムと 可動性遺伝因子2013

    • Author(s)
      永田裕二ら
    • Organizer
      第7回日本ゲノム微生物学会年会
    • Place of Presentation
      長浜
    • Year and Date
      20130308-20130310
  • [Presentation] Finishing関連の3つのツール: GenoFinisher、AceFileViewer、 ShortReadManager2013

    • Author(s)
      大坪嘉行ら
    • Organizer
      第7回日本ゲノム微生物学会年会
    • Place of Presentation
      長浜
    • Year and Date
      20130308-20130310
  • [Presentation] IncP-9群プラスミドNAH7の接合伝達開始配列の解析2013

    • Author(s)
      岸田康平ら
    • Organizer
      第7回日本ゲノム微生物学会年会
    • Place of Presentation
      長浜
    • Year and Date
      20130308-20130310
  • [Presentation] 次世代シーケンサーによる土壌細菌の環境適応遺伝子の新規探索手法 の開発2013

    • Author(s)
      石橋蓉子ら
    • Organizer
      第7回日本ゲノム微生物学会年会
    • Place of Presentation
      長浜
    • Year and Date
      20130308-20130310
  • [Presentation] 撹乱に対する土壌微生物のレジリエンス2013

    • Author(s)
      加藤広海ら
    • Organizer
      第7回日本ゲノム微生物学会年会
    • Place of Presentation
      長浜
    • Year and Date
      20130308-20130310
  • [Presentation] Genetic analysis of multiple plasmids in γ-hexachlorocylohexane-degrading bacterium Sphingomonas sp. MM-12012

    • Author(s)
      M. Tabata et al.
    • Organizer
      International Forum for Ecosystem Adaptability Science IV: Interface Between Policy and Science
    • Place of Presentation
      Sendai, Japan
    • Year and Date
      20121212-20121213
  • [Presentation] Analysis of nitrogen-related phosphotransferase system in recipient cells involved in regulation of conjugative transfer2012

    • Author(s)
      K. Inoue et al.
    • Organizer
      International Forum for Ecosystem Adaptability Science IV: Interface Between Policy and Science
    • Place of Presentation
      Sendai, Japan
    • Year and Date
      20121212-20121213
  • [Presentation] ハロアルカンデハロゲナーセLinBのbeta-HCH分解活性に関する機能進化2012

    • Author(s)
      田中裕興ら
    • Organizer
      第85回日本生化学会大会・第35回日本分子生物学会年会合同大会
    • Place of Presentation
      福岡
    • Year and Date
      20121211-20121214
  • [Presentation] 有機塩素系殺虫剤gamma-HCH分解細菌のゲノムと可動性遺伝因子に関する研究2012

    • Author(s)
      永田裕二ら
    • Organizer
      第64回日本生物工学会大会
    • Place of Presentation
      神戸
    • Year and Date
      20121023-20121026
  • [Presentation] 細菌ゲノムに存在する多様なハロアルカンデハロゲナーゼ遺伝子の機能解析2012

    • Author(s)
      田中裕興ら
    • Organizer
      第64回日本生物工学会大会
    • Place of Presentation
      神戸
    • Year and Date
      20121023-20121026
  • [Presentation] 有機塩素系殺虫剤gamma-HCH分解細菌が突然変異により炭素源非添加無機寒天培地上で生育可能となる機構の解析2012

    • Author(s)
      平野丈ら
    • Organizer
      第64回日本生物工学会大会
    • Place of Presentation
      神戸
    • Year and Date
      20121023-20121026
  • [Presentation] Genomes and mobile genetic elements of gamma-hexachlorocyclohexane-degrading bacterial strains2012

    • Author(s)
      Y. Nagata et al.
    • Organizer
      15th International Biotechnology Symposium and Exhibition (IBS 2012)
    • Place of Presentation
      Daegu, Korea
    • Year and Date
      20120916-20120921
  • [Presentation] Isolation of aromatic ring-hydroxylating oxygenase genes by cultivation-independent functional screening of metagenome from soil artificially contaminated with aromatic hydrocarbons2012

    • Author(s)
      H. Nagayama et al.
    • Organizer
      15th International Biotechnology Symposium and Exhibition (IBS 2012)
    • Place of Presentation
      Daegu, Korea
    • Year and Date
      20120916-20120921
  • [Presentation] Multiple plasmids of γ-hexachlorocylohexane-degrading bacterium Sphingomonas sp. MM-12012

    • Author(s)
      M. Tabata et al.
    • Organizer
      International Plasmid Biology Conference 2012
    • Place of Presentation
      Santander, Spain
    • Year and Date
      20120911-20120916
  • [Presentation] Response of soil microbial community against pulse perturbation by aromatic pollutants2012

    • Author(s)
      H. Kato et al.
    • Organizer
      14th International Symposium on Microbial Ecology
    • Place of Presentation
      Copenhagen, Denmark
    • Year and Date
      20120819-20120824
  • [Presentation] 環境汚染物質gamma-hexachlorocyclohexaneの分解能を有するSphingobium sp. TKS株のゲノム構造の解明2012

    • Author(s)
      大畑智史ら
    • Organizer
      環境バイオテクノロジー学会2012年度大会
    • Place of Presentation
      宇治
    • Year and Date
      20120625-20120626
  • [Presentation] 培養非依存的手法を用いた芳香族化合物複合汚染土壌からの新規分解酵素遺伝子の探索2012

    • Author(s)
      永山浩史ら
    • Organizer
      環境バイオテクノロジー学会2012年度大会
    • Place of Presentation
      宇治
    • Year and Date
      20120625-20120626
  • [Remarks] GenomeMatcherホームページ

    • URL

      http://www.ige.tohoku.ac.jp/joho/gmProject/gmhomeJP.html

  • [Remarks] GenoFinishierホームページ

    • URL

      http://www.ige.tohoku.ac.jp/joho/gf/index.php

URL: 

Published: 2014-07-24  

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