2012 Fiscal Year Annual Research Report
顆粒球系細胞の活性酸素産生を負に制御する分子の研究
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23659518
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
森尾 友宏 東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 准教授 (30239628)
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| Keywords | 顆粒球 / 活性酸素(ROS) / シグナル伝達 / リン酸化 / Btk / Mal |
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| Research Abstract |
（１）BtkによるROS産生制御機構の解析：Btk欠損によるROS産生亢進について、細菌菌体成分、オプソニン化細菌、FcgR抗体などの刺激系で検証を加えた。前二者では明らかなROS産生の亢進を認めた。FcgR刺激については32.2, IV.3, 3G8（それぞれFcgRI, II, IIIに対する抗体）を産生するハイブリドーマから抗体を精製し、F(ab2)’分画として、刺激実験を開始した。本年度は野生型、膜移行型、細胞質滞在型Malのコンストラクトを作成し、組換えタンパク発現の至適化実験から、100mgレベルのタンパク作成が可能になった。これを用いMalの局在によるROS産生制御や、会合分子を探る実験を開始した。
（２）非特異的アレルギー反応におけるBtkの関与についての検討：Btk欠損患者末梢血あるいは骨髄からCD161陽性細胞を単離し、SCF, IL-6などでマスト細胞を分化させ、採取した。得られたマスト細胞にFceR刺激を加え脱顆粒やキマーゼ、トリプターゼ産生系を立ち上げた。
（３）ItkのT細胞生存・アポトーシスにおける役割の検討：T細胞からのROS産生はluminol法で解析可能であることを明らかにし、アポトーシスへもCaspase3断片 の測定やAnnexin V検出で可能となったが、ITKの十分なknock downには成功していない。発現低下手法が確立すれば、ItkのNADPHオキシダーゼ活性への関与、アポトーシスへの関与が解析可能な段階となった。
（４）Btk欠損症の新規治療確立に向けた検討：細胞質滞在型MalのBtk欠損好中球への導入により過剰なROS産生が制御可能となった。NOG-SCIDマウスへのBtk欠損骨髄生着実験は未だ半ばであるが今後、リコピンやNAC（抗酸化薬）やMalの制御による解析の下地が整った。
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[Journal Article] Am80, a retinoic acid receptor agonist, ameliorates murine vasculitis through the suppression of neutrophil migration and activation.2013
Author(s)
Miyabe C, Miyabe Y, Miura NN, Takahashi K, Terashima Y, Morio T, Yamagata N, Ohno N, Shudo K, Suzuki J-I, Isobe M, Matsuhima K, Tsuboi R, Miyasaka N, and Nanki T.
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Journal Title
Arthritis Rheumatism.
Volume: 65
Pages: 503-512
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Impaired cell adhesion, apoptosis, and signaling in WASP-gene disrupted Nalm-6 pre-B cells and recovery of cell adhesion using a transducible form of WASp.2012
Author(s)
Sato R, Iiizumi S, Kim E-S, Honda F, Lee S-K, Adachi N, Koyama H, Mizutani S, Morio T.
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Journal Title
Int. J. Hematol.
Volume: 95
Pages: 299-310
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Alleviation of rheumatoid arthritis by cell-transducible methotrexate upon transcutaneous delivery.2012
Author(s)
Lee SW, Kim JH, Park MC, Park YB, Chae WJ, Morio T, Lee DH, Yang SH, Lee SK, Lee SK, Lee SK.
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Journal Title
Biomaterials.
Volume: 33
Pages: 1563-72
DOI
Peer Reviewed
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