2011 Fiscal Year Annual Research Report
食道癌の新規治療法の開発を目指したLINE-1メチル化レベルの網羅的解析
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23689061
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
馬場 祥史 熊本大学, 医学部附属病院, 助教 (20599708)
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| Keywords | LINE-1 / エピジェネティクス / メチル化 / 食道癌 / 予後因子 / pyrosequence |
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| Research Abstract |
ゲノム全体の低メチル化(=LINE-1の低メチル化)は、癌において重要なエピジェネティックな変化であるが、食道癌におけるLINE-1メチル化の意義を検討することが本研究の目的である。まず、Pyrosequencing technologyにより、パラフィン包埋ブロックを用いて食道癌LINE-1メチル化レベルが正確に測定できるかを検討した。
Pyrosequenceは、bisulfite→PCR→Pyroという行程からなるが、それぞれ行程を5回ずつ独立して行うことにより、その再現性を評価した。bisuifite行程及びPyro行程の標準偏差は、それぞれ1.44-2.90、0.63-3.25と比較的低値であった。また、同一腫瘍から5枚の切片を作成することにより、同一腫瘍内のheterogeneityを評価したが、標準偏差は1.37-3.31であった。これらの結果から、食道癌パラフィンブロックから作成された代表切片を用いて、PyrosequenceによりLINE-1メチル化レベルを測定することの妥当性が示された。Pyrosequenceは多数のサンプルを迅速に測定することができ、臨床応用に非常に適したツールであることから、今回の結果は非常に意義があると考えられる。この結果を示した論文は、Ann Surg Oncol.に採択された。次に、このassayを用いて、食道癌217例のLINE-1メチル化レベルを測定した。食道癌のメチル化レベルは、正常上皮と比べて有意に低値であった(p<0.0001;N=50)。癌部におけるLINE-1メチル化レベルは、平均値64.5;中央値65.0;最小値24.8;最大値91.8であった。食道癌LINE-1低メチル化症例は、高メチル化症例に比べて有意に予後不良であった(log-rank p=0.0008;単変量リスク比=2.32,95%信頼区間1.38-3.84,p=0.0017;多変量リスク比=1.81,95%信頼区間1.06-3.05,p=0.031)。このことから、食道癌LINE-1メチル化レベルは、食道癌の予後予測因子となりうることが示された。食道癌は非常に予後の悪い疾患であるが、今回の結果は患者別の個別化治療に貢献できる可能性があり、非常に臨床的意義があると考えられる。この結果は、外科分野の一流誌であるAnnals of Surgeryに採択された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
計画書に記した予定通りに研究は遂行され、意義深い結果が得られた。これらの結果は、Annals of Surgery、Annals of Surgical Oncologyという外科分野の一流誌に既に採択されている。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は、食道癌LINE-1メチル化レベルと抗癌剤感受性の関連について研究を進めていく予定である。また、食道癌細胞株を用いたinvitroの研究も開始する予定であり、準備を行っている。食道癌細胞株のLINE-1メチル化レベルを測定し、in vitroでの癌細胞浸潤能、増殖能、細胞サイクル、Docetaxe1感受性などとの関係を評価する。
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