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2011 Fiscal Year Research-status Report

休眠段階におけるリボソームのタンパク質合成抑制機構の解明

Research Project

Project/Area Number 23770206
Research InstitutionOsaka University

Principal Investigator

加藤 貴之  大阪大学, 生命機能研究科, 助教 (20423155)

Project Period (FY) 2011-04-28 – 2013-03-31
Keywords細胞休止期 / 単粒子像解析 / 低温電子顕微鏡 / 構造解析 / 100Sリボソーム
Research Abstract

地球上のほとんどの生物は常に飢餓状態に置かれており、過酷な生存競争を生き抜いてきた生物は飢餓耐性機構を備えている。微生物も例外ではなく、その耐性機構の一つがリボソームの2量体化によるタンパク質合成の抑制である。 グラム陰性菌、陽性菌共に、飢餓的ストレスに曝されると、70Sリボソームが2量体化した100Sリボソームを形成し、タンパク質の合成を抑制することが知られている。そこで、グラム陽性菌である黄色ブドウ球菌の100Sリボソームを精製し、低温電子顕微鏡を用いて構造解析を行った。その結果、大腸菌の場合と同様、2つの70SリボソームはどちらにもtRNAが存在しておらず、2つの70Sリボソームはお互いの30Sを介して2量体化していた。しかし結合部位は大腸菌とは大きく異なり、mRNAの出口にほど近い位置であることが明らかとなった。これは、グラム陰性菌のの場合、互いのmRNAの入り口を互いのS2タンパク質が塞ぐことでmRNAの結合をふさぎ、タンパク質の合成を抑制しているのに対し、グラム陰性菌の場合は出口をふさぐことで合成を抑制していることが示唆されてた。これは、飢餓的ストレスに対する応答において、2種類の細菌は、70Sリボソームの2量体化によってタンパク質合成を抑制することは同じなのに、そのメカニズムがまったく異なっていることを示唆している。 100Sリボソームの形成は、大腸菌の場合はRMF、HPFという2種類のタンパク質によって、黄色ブドウ球菌の場合HPFのホモログであるSaHPFというタンパク質によって形成される。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

試料調製を100Sリボソームの発見者である和田氏、上田氏に依頼した。両氏はこれまで100Sリボソームに対する生化学的な研究を行っており、世界で最も多くの100Sリボソームの情報を持っているため、試料調製等での問題点を即座に解決することができた。また、本研究で得られた情報をフィードバックすることにより、当初に考えていた実験方法よりも優れた実験方法を考案することができた。

Strategy for Future Research Activity

100Sリボソームは、大腸菌の場合はRMF、HPFという2種類のタンパク質によって、黄色ブドウ球菌の場合HPFのホモログであるSaHPFというタンパク質によって形成される。100Sリボソームの結合様式は、これらの因子によってのみ決定されいると考られる。そこで、RMF、HPFを持つ他の菌体の100Sリボソームの結合様式を解析し、同様にSaHPFを持つ菌体の100Sリボソームの結合様式を解析する。また、RMF、HPFを持つ菌体から70Sを精製し、そこにSaHPFを精製して混合することで、100Sリボソームが形成されるかを評価し、その構造がどちらの結合様式であるかを解析することで、前述の仮説を証明する。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

上記の実験を進めるための少額備品および消耗品:30万学会参加のための国内、国外旅費:50万円論文掲載費:20万

  • Research Products

    (19 results)

All 2012 2011

All Presentation (19 results)

  • [Presentation] ミニセルの低温電子顕微鏡トモグラフィーによる細菌内べん毛モーターの構造2012

    • Author(s)
      川本 晃大
    • Organizer
      2011年度べん毛研究交流会
    • Place of Presentation
      ラフォーレ修善寺
    • Year and Date
      2012年3月9日
  • [Presentation] 細菌べん毛フック繊維連結部の低温電子顕微鏡像解析による構造2012

    • Author(s)
      牧野 文信
    • Organizer
      2011年度べん毛研究交流会
    • Place of Presentation
      ラフォーレ修善寺
    • Year and Date
      2012年3月9日
  • [Presentation] 低温電子線トモグラフィーによる磁性細菌MO-1のユニークなべん毛構造2012

    • Author(s)
      Ruan Juanfang
    • Organizer
      2011年度べん毛研究交流会
    • Place of Presentation
      ラフォーレ修善寺
    • Year and Date
      2012年3月9日
  • [Presentation] 細菌べん毛モーター・スイッチ複合体の低温電子顕微鏡像解析による構造2012

    • Author(s)
      宮田 知子
    • Organizer
      2011年度べん毛研究交流会
    • Place of Presentation
      ラフォーレ修善寺
    • Year and Date
      2012年3月9日
  • [Presentation] Structural analysis of flagella motor by cryoEM2012

    • Author(s)
      加藤 貴之
    • Organizer
      Join Seminar Centre for BioImaging Science
    • Place of Presentation
      National University of Singapore
    • Year and Date
      2012年1月12日
  • [Presentation] 電子顕微鏡画像自動収集2011

    • Author(s)
      加藤 貴之
    • Organizer
      電子顕微鏡機能イメージングの医学・生物学への応用
    • Place of Presentation
      岡崎総合バイオサイエンスセンター
    • Year and Date
      2011年9月1日
  • [Presentation] The mechanisms of ribosome in hibernation stage.2011

    • Author(s)
      Kato, T
    • Organizer
      Gordon Research Conference on Three-dimensional Electron Microscopy
    • Place of Presentation
      Colby-Sawyer College, Boston, USA,
    • Year and Date
      2011年6月28日
  • [Presentation] Structural analysis of the flagellar hook-filament junction by electron cryomicroscopy.2011

    • Author(s)
      Makino, F
    • Organizer
      Gordon Research Conference on Three-dimensional Electron Microscopy
    • Place of Presentation
      Colby-Sawyer College, Boston, USA
    • Year and Date
      2011年6月28日
  • [Presentation] Mini-cellを用いた細菌内べん毛モーターの構造解析2011

    • Author(s)
      川本 晃大、加藤 貴之、Kelly Hughes、難波 啓一
    • Organizer
      第8回21世紀大腸菌研究会
    • Place of Presentation
      ホテル木曽路
    • Year and Date
      2011年5月19日
  • [Presentation] 細菌べん毛フック繊維連結部の極低温電子顕微鏡による構造解析2011

    • Author(s)
      牧野 文信、加藤 貴之、宮田 知子、難波 啓一
    • Organizer
      第8回21世紀大腸菌研究会
    • Place of Presentation
      ホテル木曽路
    • Year and Date
      2011年5月19日
  • [Presentation] 低温電子顕微鏡を用いた電子線トモグラフィーによる生体超分子の立体構造解析2011

    • Author(s)
      加藤 貴之、Ruan Juanfan、川本 晃大、松尾 里紗、宮田 真人、難波 啓一
    • Organizer
      日本顕微鏡学会第67回学術講演会(招待講演)
    • Place of Presentation
      福岡国際会議場
    • Year and Date
      2011年5月16日
  • [Presentation] 電子線クライオトモグラフィーによる細胞内分子モーターの構造解析2011

    • Author(s)
      川本晃大
    • Organizer
      平成23年度生理学研究所研究会「電子顕微鏡機能イメージングの医学・生物学への応用」
    • Place of Presentation
      岡崎統合バイオサイエンスセンター
    • Year and Date
      2011年11月30日-12月1日
  • [Presentation] Study of the unique flagellar apparatus of magnetotactic bacteria MO-1 by electron cryotomography2011

    • Author(s)
      Ruan, J., Kato, T., Zhang, W-J., Wu, L-F. & Namba, K
    • Organizer
      平成23年度生理学研究所研究会「電子顕微鏡機能イメージングの医学・生物学への応用」
    • Place of Presentation
      岡崎統合バイオサイエンスセンター
    • Year and Date
      2011年11月30日-12月1日
  • [Presentation] 飢餓的ストレス下における細菌の生存戦略2011

    • Author(s)
      加藤 貴之、上田 雅美、宮田 知子、吉田 秀司、牧 泰史、古池 晶、境 晶子、和田 明、難波 啓一
    • Organizer
      日本生物物理学会第49回年会
    • Place of Presentation
      兵庫県立大・姫路書写キャンパス
    • Year and Date
      2011年11月18日
  • [Presentation] Mini-cellを用いた細菌内べん毛モーターの構造解析2011

    • Author(s)
      川本 晃大、加藤 貴之、Kelly Hughes、難波 啓一
    • Organizer
      日本生物物理学会第49回年会
    • Place of Presentation
      兵庫県立大・姫路書写キャンパス
    • Year and Date
      2011年11月18日
  • [Presentation] べん毛モーター・スイッチ複合体の極低温電子顕微鏡による構造解析2011

    • Author(s)
      宮田 知子、加藤 貴之、藤井 高志、中村 修一、松波 秀行、難波 啓一
    • Organizer
      日本生物物理学会第49回年会
    • Place of Presentation
      兵庫県立大・姫路書写キャンパス
    • Year and Date
      2011年11月18日
  • [Presentation] Study of the unique flagellar apparatus of magnetotactic bacteria MO-1 by elecgtron cryotomography2011

    • Author(s)
      Ruan Juanfang、加藤 貴之、Zhang Wei-Jia、Santini Claire-Lise、Bernadac Alain、Wu Long-Fei、難波 啓一
    • Organizer
      日本生物物理学会第49回年会
    • Place of Presentation
      兵庫県立大・姫路書写キャンパス
    • Year and Date
      2011年11月18日
  • [Presentation] 細菌べん毛フック繊維連結部の極低温電子顕微鏡による構造解析2011

    • Author(s)
      牧野 文信、加藤 貴之、宮田 知子、難波 啓一
    • Organizer
      日本生物物理学会第49回年会
    • Place of Presentation
      兵庫県立大・姫路書写キャンパス
    • Year and Date
      2011年11月16日
  • [Presentation] 低温電子顕微鏡による生体試料の立体構造解析2011

    • Author(s)
      加藤 貴之
    • Organizer
      第3回光塾(招待講演)
    • Place of Presentation
      東京大学大学院・薬学研究科
    • Year and Date
      2011年10月22日

URL: 

Published: 2013-07-10  

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