2016 Fiscal Year Annual Research Report
Spatiotemporal and structural analysis of T cell activation regulation
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24229004
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| Research Institution | Institute of Physical and Chemical Research |
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Principal Investigator |
斉藤 隆 国立研究開発法人理化学研究所, 統合生命医科学研究センター, グループディレクター (50205655)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
多根 彰子 (橋本彰子) 国立研究開発法人理化学研究所, 統合生命医科学研究センター, 上級研究員 (10415226)
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| Project Period (FY) |
2012-05-31 – 2017-03-31
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| Keywords | T細胞 / TCR-CD3複合体 / 構造解析 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は、TCRを介する活性化シグナルの制御機構を解析するために、シグナル伝達の場であるTCRミクロクラスターを介する活性化シグナルの実態をイメージング解析と共に、中心のTCR-CD3複合体の構造を解析することを目指している。シグナル伝達との関係を明らかにするために、TCR-CD3の細胞外領域だけではなく、膜貫通・細胞内領域を含む全長の複合体を解析する必要がある。膜貫通領域を含む蛋白を界面活性剤存在下でリポソームとして再構成する方法で各ダイマーを、その後全マルチマーを形成する方法をとった。
昨年度までにTCR(a,b), CD3(g,d,e,z)の各鎖を無細胞系で合成することに成功した。今年度まで計画を延長させたのは、これら合成蛋白を使いダイマー、および全マルチマーの形成と精製を成功させるためである。各々に異なるtagを付けて合成し、ダイマー形成の為に、in vitroでtag切断できるように工夫した。ダイマー形成の量比を変化させて最大量になるようにし、CD3の各ダイマー：CD3ge, CD3de, CD3zzの形成に成功した。しかし、CD3zzの精製はできたものの、他のダイマーは精製後の量は少なく、マルチマー形成のためには不十分であった。またTCRabダイマーもCD3ダイマー同様に、形成はできたが量的に不十分で、十分量を得るような改善に至らなかった。
全複合体再構成を成功させることはできなかったが、比較的多くダイマーとして精製できたCD3zzを含むリポソームを、CD3z欠損T細胞にin vitroで加えると、細胞表面のTCR発現が昂進し、抗TCR抗体の刺激に反応するようになったことから、形成したCD3zダイマーは機能的であることが証明された。
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| Research Progress Status |
28年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
28年度が最終年度であるため、記入しない。
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Research Products
(11 results)
