2013 Fiscal Year Annual Research Report
生物医学研究推進のためのマーモセットＭＨＣ情報の総合的理解と研究基盤の開発
| Project/Area Number |
24300155
|
|---|
| Research Institution | Tokai University |
|---|
Principal Investigator |
椎名 隆 東海大学, 医学部, 准教授 (00317744)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
鈴木 隆二 独立行政法人国立病院機構(相模原病院臨床研究センター), 診断・治療研究室, 室長 (70373470)
亀谷 美恵 東海大学, 医学部, 講師 (50338787)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
|
| Keywords | マーモセット / ＭＨＣ / 多型 / 免疫 / 機能 |
|---|
| Research Abstract |
HLA-DRB1の直系遺伝子であるCaja-DRBを含むCaja遺伝子にて、次世代シークエンシング（NGS）によるDNAタイピング法を開発し、Caja領域におけるハプロタイプ（Hp）構造を明らかにしつつある。具体的には、45個体のRNAサンプルを用い、Caja遺伝子の翻訳領域におけるRT-PCR、PCR産物のサブクローニング・サンガーシークエンシング（サブクローニング）法により、Cajaアリル配列を得た。その後、それら配列から多型に富む領域を含み、かつ保存性の高い部位にNGS 用PCRプライマーを再設計した。RT-PCR後、Roche GS Junior systemを用いたアンプリコンシークエンシング法により塩基配列を決定し、サブクローニング法による結果と比較することによりNGS法の有用性を評価した。サブクローニング法では1個体あたり5~15種類のCajaクラスI配列が検出されたのに対して、NGS法では1個体あたり11~17種類が検出された。得られた多型情報から、少なくとも10種類のCaja-G Hpが推定され、ハプロイドあたり2~7個の発現Caja-G遺伝子が検出された。以上の結果より、本研究にて開発したDNAタイピング法は、移植研究の際のドナーとレシピエントの選抜やMHC情報付加マーモセットの系統化などに有用であると考えられた。また野生型の母親に形成されたGFPトランスジェニック・コモンマーモセット胎盤をGFPの発現を指標に解析したところ、母体と胎仔の組織を識別可能である事が明らかとなった。この方法を用いてマイクロキメリズムの程度を推定可能であるとともに、胎盤における発現解析も可能となると考えられる。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
マイクロキメリズムによるMHC遺伝子の混入によりMHCハプロタイプの推定が困難であると思われたが、この問題を克服することができたことから、今後のハプロタイプ情報に基づくMHC発現解析や機能解析に移行する目途がついたため
|
| Strategy for Future Research Activity |
今後は10家系、計40個体の多型解析を行い、これまでに得られた血縁個体や非血縁個体を含む計45個体を含めて各MHC遺伝子の多型性やMHCハプロタイプ構造を明らかにする。またMHCタイピングシステムを完成させ、多検体のスクリーニングからMHCホモ接合体系統を確立するための方法論を開発するとともに、タイピングされた個体を用いてリンパ球混合培養 (MLC)を行い、MHCハプロタイプ間の相違を見いだす。さらには、機能不明なMHCクラスI遺伝子である Caja-B, Caja-E, Caja-G についての遺伝子座特異的なモノクローナル抗体作製やトランスフェクタントの樹立、および胎盤形成に関連した遺伝子発現調節機構の解析を行い、これら遺伝子の機能を明らかにすることを目指す。
|
| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
本年度に受理された論文の投稿料と別刷代、および10家系計40個体の多型解析に必要な試薬代の支払いが本年度の使用期日までに間に合わなかったため
直接経費を次年度使用額から、受理された論文の投稿料と別刷代 (243,404円) ならびに10家系計40個体の多型解析の試薬代 (350801円) を充当する。
|
Research Products
(7 results)
-
[Journal Article] Genomic sequence analysis of the major histocompatibility complex (MHC) class I G/F segment in common marmoset (Callithrix jacchus)2014
Author(s)
Kono A, Brameier M, Roos C, Suzuki S, Shigenari A, Kametani Y, Kitaura K, Suzuki R, Inoko H, Walter L, Shiina T
-
Journal Title
J. Immunol.
Volume: 192
Pages: 3239-3246
DOI
Peer Reviewed
-
-
-
-
-
-
