2012 Fiscal Year Annual Research Report
DNAクロスリンク修復におけるCtIPヌクレアーゼ制御機構の解析
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24310042
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
高田 穣 京都大学, 放射線生物研究センター, 教授 (30281728)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
海野 純也 京都大学, 放射線生物研究センター, 研究員 (50614153)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | Fanconi anemia / FANCD2 / CtIP / モノユビキチン化 / DNA損傷応答 / DNA修復 / チェックポイント |
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| Research Abstract |
ゲノムがDNAクロスリンク傷害をうけると、ファンコニ貧血(FA)経路の活性化によって
FANCD2/FANCI(ID)複合体がモノユビキチン化をうけ、DNA傷害部位に結合する。モノユビキチン化ID複合体は、FANlヌクレアーゼをはじめとした下流エフェクター分子の働きをコーディ
ネートし、DNAクロスリンク修復に必須の機能を発揮すると考えられる。FA経路の欠損病態であるFAでは、発がんと骨髄幹細胞不全という重大な結果を伴うため、ID複合体の機能を理解することは医学的に重要である。我々は、FANCD2に会合するあらたなエフェクター分子として、DNA二重鎖切断修復に重要なヌクレアーゼ因子であるCtIP蛋白質を同定した。本研究は、この発見をもとにCtIPのID複合体による制御機構を解析し、DNAクロスリンク修復における役割を解明しようとするものである。FAの病態解明と、将来のFA経路の人為的操作へとつながる成果を目指す。
本年度までに以下の諸点を明らかにした。
精製したヒトFANcD2複合体に、FANCIなどの既知の会合蛋白以外にctIPの存在を確認した(首都大学東京、礒辺教授らとの共同研究)。さらに精製したFANCD2と(早稲田大胡桃坂教授との共同研究)と購入したGST_CtIPとのインビトロの結合をプルダウンによって確認した。さらに、CtIPとFANcD2の会合は、免疫沈降法、酵母2ハイブリッド法、ほ乳類細胞における2ハイブリッド法などでも確認された。FANCD2は、クロスリンク障害部位に集積してフォーカスを形成するが、ctIPのフォーカス形成はFANcD2と共局在しており、さらにFANcD2の存在とユビキチン化に依存していた。さらに、CtIPとFANCD2との会合ドメインの同定に成功した。これに基づき、点変異による会合不能の変異体を作製し、局在と機能について検討を進めている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初予定したデータが順調に得られており、おおむね順調に進展していると考えている
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| Strategy for Future Research Activity |
FANcD2とCtIP蛋白質の会合様式の詳細を明らかにすることが重要である。そのため、いまだに不明確なCtIP自体がユビキチンと結合する可能性を検討する。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
抗体の作成を受託して行っており、その完成を待って支出するためには、次年度に繰り越す必要があった。翌年度にはその費用を支出し、さらに、様々な試薬消耗品とユビキチン蛋白質などの特殊試薬購入費用に充てる予定である。
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Research Products
(13 results)
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[Journal Article] Matched sibling donor stem cell transplantation for Fanconi anemia patients with T-cell somatic mosaicism.2012
Author(s)
Yabe M, Shimizu T, Morimoto T, Koike T, Takakura H, Tsukamoto H, Muroi K, Oshima K, As ami K, Takata M, Yamashita T, Kato S, Yabe H.
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Journal Title
Pediatr Transplant.
Volume: 4
Pages: 340-5
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Hi s tone chaperone activity of Fanconi anemia proteins, FANCD2 and FANCI, is required for DNA crosslink repair.2012
Author(s)
Sato K, Ishiai M, Toda K, Furukoshi S, Osakabe A, Tachiwana H, Takizawa Y, Kagawa W, Kitao H, Dohmae N, Obuse C, Kimura H, Takata M, Kurumizaka H.
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Journal Title
EMBO J.
Volume: 31 (17)
Pages: 3524-36
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] A ubiaui t in-binding protein, FAAP20, links RNF8-mediated ubiaui t inat ion to the Fanconi anemia DNA repair network.2012
Author(s)
Yan Z, Guo R, Paramasivam M, Shen W, Ling C, Fox D 3rd, Wang Y, Oostra AB, Kuehl J, Lee DY, Takata M, Hoatlin ME, Schindler D, Joenje H, de Winter JP, Li L, Seidman MM, Wang W
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Journal Title
Mol Cell.
Volume: 47(1)
Pages: 61-75
DOI
Peer Reviewed
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