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2012 Fiscal Year Annual Research Report

DNAクロスリンク修復におけるCtIPヌクレアーゼ制御機構の解析

Research Project

Project/Area Number 24310042
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (B)

Research InstitutionKyoto University

Principal Investigator

高田 穣  京都大学, 放射線生物研究センター, 教授 (30281728)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 海野 純也  京都大学, 放射線生物研究センター, 研究員 (50614153)
Project Period (FY) 2012-04-01 – 2015-03-31
KeywordsFanconi anemia / FANCD2 / CtIP / モノユビキチン化 / DNA損傷応答 / DNA修復 / チェックポイント
Research Abstract

ゲノムがDNAクロスリンク傷害をうけると、ファンコニ貧血(FA)経路の活性化によって
FANCD2/FANCI(ID)複合体がモノユビキチン化をうけ、DNA傷害部位に結合する。モノユビキチン化ID複合体は、FANlヌクレアーゼをはじめとした下流エフェクター分子の働きをコーディ
ネートし、DNAクロスリンク修復に必須の機能を発揮すると考えられる。FA経路の欠損病態であるFAでは、発がんと骨髄幹細胞不全という重大な結果を伴うため、ID複合体の機能を理解することは医学的に重要である。我々は、FANCD2に会合するあらたなエフェクター分子として、DNA二重鎖切断修復に重要なヌクレアーゼ因子であるCtIP蛋白質を同定した。本研究は、この発見をもとにCtIPのID複合体による制御機構を解析し、DNAクロスリンク修復における役割を解明しようとするものである。FAの病態解明と、将来のFA経路の人為的操作へとつながる成果を目指す。
本年度までに以下の諸点を明らかにした。
精製したヒトFANcD2複合体に、FANCIなどの既知の会合蛋白以外にctIPの存在を確認した(首都大学東京、礒辺教授らとの共同研究)。さらに精製したFANCD2と(早稲田大胡桃坂教授との共同研究)と購入したGST_CtIPとのインビトロの結合をプルダウンによって確認した。さらに、CtIPとFANcD2の会合は、免疫沈降法、酵母2ハイブリッド法、ほ乳類細胞における2ハイブリッド法などでも確認された。FANCD2は、クロスリンク障害部位に集積してフォーカスを形成するが、ctIPのフォーカス形成はFANcD2と共局在しており、さらにFANcD2の存在とユビキチン化に依存していた。さらに、CtIPとFANCD2との会合ドメインの同定に成功した。これに基づき、点変異による会合不能の変異体を作製し、局在と機能について検討を進めている。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

当初予定したデータが順調に得られており、おおむね順調に進展していると考えている

Strategy for Future Research Activity

FANcD2とCtIP蛋白質の会合様式の詳細を明らかにすることが重要である。そのため、いまだに不明確なCtIP自体がユビキチンと結合する可能性を検討する。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

抗体の作成を受託して行っており、その完成を待って支出するためには、次年度に繰り越す必要があった。翌年度にはその費用を支出し、さらに、様々な試薬消耗品とユビキチン蛋白質などの特殊試薬購入費用に充てる予定である。

  • Research Products

    (13 results)

All 2013 2012 Other

All Journal Article (8 results) (of which Peer Reviewed: 8 results) Presentation (4 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Synergistic Elfect of Olaparib with Combination of Cisplatin on PTEN-Deficient Lung Cancer Cells.2013

    • Author(s)
      Minami D, Takigawa N, Takeda H, Takata M, Och i N, Ichihara E, Hi samo to A, Hotta K, Tanimoto M, Kiura K.
    • Journal Title

      Mol Cancer Res.

      Volume: 11(2) Pages: 140-8

    • DOI

      10.1158/1541-7786.MCR-12-0401.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] NBSl directly activates ATR independently of MRE11 and T0PBP1.2013

    • Author(s)
      Kobayashi M, Hayashi N, Takata M, Yamamoto K,
    • Journal Title

      Genes Cells.

      Volume: 18(3) Pages: 238-46

    • DOI

      10.1111/gtc.12031.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] DNA robustly st imulates FANCD2 monoubiauitylation in the complex with FANCI.2012

    • Author(s)
      Sato K, Toda K, Ishiai M, Takata M, Kurumizaka H.
    • Journal Title

      Nucleic Acids Res.

      Volume: 40(10) Pages: 4553-61.

    • DOI

      10.1093/nar/gks053.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Matched sibling donor stem cell transplantation for Fanconi anemia patients with T-cell somatic mosaicism.2012

    • Author(s)
      Yabe M, Shimizu T, Morimoto T, Koike T, Takakura H, Tsukamoto H, Muroi K, Oshima K, As ami K, Takata M, Yamashita T, Kato S, Yabe H.
    • Journal Title

      Pediatr Transplant.

      Volume: 4 Pages: 340-5

    • DOI

      10.1111/j.1399-3046.2012.01669.x.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Hi s tone chaperone activity of Fanconi anemia proteins, FANCD2 and FANCI, is required for DNA crosslink repair.2012

    • Author(s)
      Sato K, Ishiai M, Toda K, Furukoshi S, Osakabe A, Tachiwana H, Takizawa Y, Kagawa W, Kitao H, Dohmae N, Obuse C, Kimura H, Takata M, Kurumizaka H.
    • Journal Title

      EMBO J.

      Volume: 31 (17) Pages: 3524-36

    • DOI

      10.1038/emboj.2012.197.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Mcm8 and Mcm9 Form a Complex that Functions in Homologous Recombination Repair Induced by DNA Inters trand Crosslinks.2012

    • Author(s)
      Nishimura K, Ishiai M, Horikawa K, Fukagawa T, Takata M, Takisawa H, Kanemaki MT.
    • Journal Title

      Mol Cell.

      Volume: 47(4) Pages: 511-22

    • DOI

      10.1016/j.molcel.2012.05.047.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] A ubiaui t in-binding protein, FAAP20, links RNF8-mediated ubiaui t inat ion to the Fanconi anemia DNA repair network.2012

    • Author(s)
      Yan Z, Guo R, Paramasivam M, Shen W, Ling C, Fox D 3rd, Wang Y, Oostra AB, Kuehl J, Lee DY, Takata M, Hoatlin ME, Schindler D, Joenje H, de Winter JP, Li L, Seidman MM, Wang W
    • Journal Title

      Mol Cell.

      Volume: 47(1) Pages: 61-75

    • DOI

      10.1016/j.molcel.2012.05.026.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Establishment of the DNA repair-defective mutants in DT40 cells.2012

    • Author(s)
      Ishiai M, Dchida E, and Takata M.
    • Journal Title

      Methods Mol Biol.

      Volume: 920 Pages: 39-49

    • DOI

      10.1007/978-1-61779-998-3_4.

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Molecular pathogenesis of Fanconi anemia2012

    • Author(s)
      Minoru Takata
    • Organizer
      第54回日本小児血液・がん学会学術集会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(神奈川県)
    • Year and Date
      20121201-20121202
  • [Presentation] Genetic interplay between the Fanconi anemia pathway and aldehyde metabolism in humans2012

    • Author(s)
      Minoru Takata, Asuka Hiral, Naoya Suzuki, Akira Niwa, Tatsutoshi Nakahata, Hiromasa Yabe, Megumu K. Saito, Keitaro Matsuo, Miharu Yabe
    • Organizer
      28th RBC-NIRS INTERNATIONAL SYMPOSIUM
    • Place of Presentation
      コープイン京都(京都府)
    • Year and Date
      20121129-20121130
  • [Presentation] Genetic interplay between the Fanconi anemia pathway and aldehyde metabolism in humans2012

    • Author(s)
      Minoru Takata, Asuka Hira, Naoya Suzuki, Akira Niwa, Tatsutoshi Nakahata, Hiromasa Yabe, Megumu K. Saito, Keitaro Matsuo, Miharu Yabe
    • Organizer
      The 8th 3R Symposium
    • Place of Presentation
      淡路夢舞台国際会議場(兵庫県)
    • Year and Date
      20121125-20121128
  • [Presentation] Crosstalk signaling between checkpoint and the Fanconi anemia DNA repair pathway2012

    • Author(s)
      Junya Unno, Junya Tomida, Tomoko Shigechi, Akiko l taya, and Minoru Takata
    • Organizer
      第71回日本癌学会学術総会
    • Place of Presentation
      ロイトン札幌・ホテルさっぽろ芸文館・札幌市教育文化会館(北海道)
    • Year and Date
      20120919-20120921
  • [Remarks]

    • URL

      http://house.rbc.kyoto-u.ac.jp/Late_Effect/Japanese_site/Welcom.html

URL: 

Published: 2014-07-16  

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