• Search Research Projects
  • Search Researchers
  • How to Use
  1. Back to project page

2014 Fiscal Year Annual Research Report

HP1とポリコーム複合体が形成するヘテロクロマチンの連携と機能

Research Project

Project/Area Number 24370071
Research InstitutionHokkaido University

Principal Investigator

小布施 力史  北海道大学, 先端生命科学研究科(研究院), 教授 (00273855)

Project Period (FY) 2012-04-01 – 2015-03-31
Keywordsヘテロクロマチン / HP1 / ポリコーム複合体 / G9a複合体
Outline of Annual Research Achievements

本課題は、HP1が形成する構成的ヘテロクロマチンとポリコーム(PcG)複合体が形成する条件的ヘテロクロマチンとのクロストークの分子基盤を明らかにすることを目的としている。申請者らによるプロテオミクス解析により、HP1結合因子としてPcGのうちPRC2 (PcG repressive complex 2)複合体とG9a複合体が同じ結合様式でHP1と相互作用することが示唆された。昨年度までに、PRC2複合体の相互ネットワークを明らかにした。これを踏まえて今年度は以下の研究を実施した。
G9a複合体の構成因子、G9a、GLP、WIZにタグを付加して安定発現株を作製した。これらの安定株を樹立し、用いて免疫沈降による複合体解析を行った。新規のG9a結合タンパク質を4種類見出し、G9a複合体の多様性が示唆された。一方、PRC2複合体がどのように構成されているのか、各サブユニット間の相互作用を明らかにする方法として、細胞抽出液からの免疫沈降法、酵母2ハイブリッド法など検討した結果、バキュロウイルス発現系が有効であることを実証した。具体的には、複合体構成因子にそれぞれ異なるタグを付加して共発現することにより、相互作用の有無を確認することができることがわかった。また、PRC2複合体を構成するコアのサブユニットであるEZH2、EED、SUZ12、RbAp46を共発現させ、EZH2に付加したタグから免疫沈降により精製を行うとヒストンメチル化活性を再構成することができた。これらの解析から、バキュロウイルス発現系により、PRC2をはじめとするヒストンメチル化酵素の細胞中の複合体の再構成と、複数構成因子の相互作用の検定が可能となった。これらの知見、技術は、HP1、PRC2、G9aが関与するエピジェネティックスのネットワークの実態の解明に役立つものである。

Research Progress Status

26年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

26年度が最終年度であるため、記入しない。

Causes of Carryover

26年度が最終年度であるため、記入しない。

Expenditure Plan for Carryover Budget

26年度が最終年度であるため、記入しない。

  • Research Products

    (19 results)

All 2015 2014 Other

All Journal Article (3 results) Presentation (11 results) (of which Invited: 4 results) Book (1 results) Remarks (4 results)

  • [Journal Article] An annexin A1-FPR1 interaction contributes to necroptosis of keratinocytes in severe cutaneous adverse drug reactions.2014

    • Author(s)
      Saito N
    • Journal Title

      Science Translational Medicine.

      Volume: 6 Pages: 245-295

    • DOI

      10.1126/scitranslmed.3008227.

  • [Journal Article] CxxC-ZF domain is needed for KDM2A to demethylate histone in rDNA promoter in response to starvation.2014

    • Author(s)
      Tanaka Y
    • Journal Title

      Cell Structure and Function

      Volume: 39 Pages: 79-92

    • DOI

      10.1247/csf.13022.

  • [Journal Article] A novel method for purification of the endogenously expressed fission yeast Set2 complex.2014

    • Author(s)
      Suzuki S
    • Journal Title

      Protein Expression and Purification.

      Volume: 97 Pages: 44-49

    • DOI

      10.1016/j.pep.2014.02.005.

  • [Presentation] DSB repair pathway choice is controlled by differential phosphorylation of 53BP12015

    • Author(s)
      磯部真也
    • Organizer
      KEYSTONE SYMPOSIA "Genomic Instability and DNA Repair"
    • Place of Presentation
      Whistler, Canada
    • Year and Date
      2015-03-01 – 2015-03-06
  • [Presentation] ヘテロクロマチンと染色体の機能構造2014

    • Author(s)
      小布施力史
    • Organizer
      第160回染色体研究会
    • Place of Presentation
      神奈川県民ホール(神奈川県)
    • Year and Date
      2014-12-13 – 2014-12-14
    • Invited
  • [Presentation] ORC結合タンパク質ORCBP1の機能解析2014

    • Author(s)
      大久保 義真
    • Organizer
      第37回日本分子生物学会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(横浜市)
    • Year and Date
      2014-11-25 – 2014-11-27
  • [Presentation] アリル特異的ChIP-seq法によるマウス不活性化X染色体のクロマチン動態の解明2014

    • Author(s)
      長尾 恒治
    • Organizer
      第37回日本分子生物学会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(横浜市)
    • Year and Date
      2014-11-25 – 2014-11-27
  • [Presentation] ヒトPRC2 (Polycomb Repressive Complex2) 複合体構成因子の解析2014

    • Author(s)
      石本 祥平
    • Organizer
      第37回日本分子生物学会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(横浜市)
    • Year and Date
      2014-11-25 – 2014-11-27
  • [Presentation] HPB66は53BP1と結合し、相同組換え修復を促進する2014

    • Author(s)
      磯部 真也
    • Organizer
      第37回日本分子生物学会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(横浜市)
    • Year and Date
      2014-11-25 – 2014-11-27
  • [Presentation] HP1結合タンパク質の解析によるヘテロクロマチンの構造と機能の理解2014

    • Author(s)
      小布施 力史
    • Organizer
      第37回日本分子生物学会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(横浜市)
    • Year and Date
      2014-11-25 – 2014-11-27
    • Invited
  • [Presentation] Elucidation of structure and function of heterochromatin through human HP1 binding proteins2014

    • Author(s)
      小布施力史
    • Organizer
      The 9th 3R Symposium
    • Place of Presentation
      時之栖(静岡)
    • Year and Date
      2014-11-17 – 2014-11-21
    • Invited
  • [Presentation] HPB66 facilitates homologues recombination by counteracting with Rif12014

    • Author(s)
      磯部真也
    • Organizer
      The 9th 3R Symposium
    • Place of Presentation
      時之栖(静岡)
    • Year and Date
      2014-11-17 – 2014-11-21
  • [Presentation] SMCHD1-HBiX1複合体によるヘテロクロマチンの凝縮2014

    • Author(s)
      長尾恒治
    • Organizer
      第87回生化学会
    • Place of Presentation
      京都国際会議場(京都)
    • Year and Date
      2014-10-16 – 2014-10-18
    • Invited
  • [Presentation] ヒトおよびマウスにおける不活性X染色外凝縮機構2014

    • Author(s)
      小布施 力史
    • Organizer
      第8回日本エピジェネティクス研究会年会
    • Place of Presentation
      東京大学(東京)
    • Year and Date
      2014-05-25 – 2014-05-27
  • [Book] 次世シーケンサーを用いた網羅的エピジェネティクス解析:ChIP-seq法など2014

    • Author(s)
      長尾恒治
    • Total Pages
      120-127
    • Publisher
      シーエムシー出版
  • [Remarks] 北海道大学 大学院先端生命科学研究院 分子細胞生物学研究室

    • URL

      http://altair.sci.hokudai.ac.jp/infgen/

  • [Remarks] researchmap

    • URL

      http://researchmap.jp/obuse/

  • [Remarks] 研究紹介

    • URL

      http://www.lfsci.hokudai.ac.jp/labs/infgen/nsmb2013/

  • [Remarks] 論文プレリリース

    • URL

      http://www.hokudai.ac.jp/news/130401_pr_sci.pdf

URL: 

Published: 2016-06-01  

Information User Guide FAQ News Terms of Use Attribution of KAKENHI

Powered by NII kakenhi